Polymerase chain reaction (PCR) untuk tuberkulosis

Tuberkulosis adalah salah satu penyakit paling berbahaya yang telah diderita manusia selama ratusan tahun. Meskipun para ilmuwan dapat mengidentifikasi agen penyebab dan menemukan antibiotik untuk menghilangkannya, pengobatan tidak selalu berhasil. Alasan utamanya adalah periode panjang penyakit laten atau laten, yang dapat berlangsung beberapa tahun. Diagnosis yang terlambat secara signifikan mengurangi peluang pasien untuk pulih dan hidup penuh.

Apa itu PCR?

Untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis dalam tubuh selama lebih dari seratus tahun, tes Mantoux telah berhasil digunakan. Metode lain telah membuktikan diri dengan baik: kultur bakteriologis dalam media buatan, mikroskop smear, ELISA. Namun, sejumlah besar komplikasi dan hasil positif palsu, serta durasi beberapa metode, membutuhkan pengenalan teknologi baru ke dalam metodologi diagnostik. Sebuah terobosan besar dalam bidang mikrobiologi adalah munculnya analisis PCR untuk tuberkulosis. Selama beberapa dekade, telah menunjukkan efektivitasnya dan banyak digunakan untuk diagnosis banding dari berbagai bentuk TBC.

Analisis PCR untuk TBC atau reaksi rantai polimerase adalah metode untuk mendeteksi DNA bakteri atau fragmennya, yang didasarkan pada peningkatan molekul asam nukleat di bawah aksi enzim DNA polimerase. Untuk hasil yang positif, hanya satu molekul DNA patogen yang mencukupi, oleh karena itu, metode ini dianggap sangat sensitif. Diagnosis OCP pada tuberkulosis lebih efektif daripada menabur mikobakteri dalam lingkungan buatan, karena, tidak seperti metode kultur, memungkinkan untuk membedakan antara galur liar dan galur vaksin yang divaksinasi dengan BCG. Ini menghindari kesalahan positif dan membuat diagnosis lebih akurat.

Manfaat PCR

Diagnosis PCR untuk TBC memungkinkan untuk mendeteksi bacillus Koch dalam setiap lingkungan biologis suatu organisme dengan penentuan komposisi kuantitatif mereka bahkan pada tahap awal penyakit, ketika mikobakteri dalam hibernasi. Diagnosis penyakit pada fase laten memungkinkan untuk memulai pengobatan profilaksis tepat waktu, untuk mencegah perkembangan fokus peradangan di paru-paru dan munculnya komplikasi pada organ dan sistem lain. Selain itu, tes PCR untuk TBC memiliki beberapa keunggulan:

• spesifisitas tinggi - 90-100%;
• kecepatan tinggi - dari 4 jam hingga 2 hari;
• sensitivitas tinggi, terutama pada defisiensi imun;
• diagnosis diferensial.

Keuntungan utama dari metode ini adalah bahwa diagnosis CRC tuberkulosis pada anak-anak memungkinkan untuk membedakan bentuk penyakit yang disebarluaskan dari fokus terbatas, bahkan dengan hasil negatif dari tes lain. Pengujian diferensial memungkinkan Anda memilih rejimen pengobatan yang tepat dan meningkatkan efektivitas terapi.

Spesifisitas tinggi dari analisis ini dicapai dengan menghilangkan reaksi silang dengan molekul asam nukleat lainnya, dan sensitivitas yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi mikobakteri bahkan dalam volume kecil dari bahan yang dikumpulkan. Metode PCR sputum untuk tuberkulosis memiliki keandalan terbesar, spesifisitasnya mencapai 100% dibandingkan dengan studi bahan biologis lainnya.

Mekanisme khusus PCR memberikan banyak peluang untuk mendeteksi stik Koch pada pasien yang mengalami gangguan sistem imun. Menurut metode analisis, reaksi mendeteksi antigen, sehingga tidak masalah jika tubuh memproduksi antibodi terhadap patogen, atau tidak. Dengan demikian, dimungkinkan untuk mendiagnosis bentuk luar paru penyakit dan kasus lanjut pada pasien dengan ketidakakuratan dalam sistem kekebalan tubuh, yang tidak mungkin menggunakan metode lain.

Kekurangan dari metode ini

Meskipun banyak keuntungan dan sensitivitas tes yang tinggi, PCR untuk TBC dapat memberikan hasil negatif palsu. Karena sejumlah kecil biomaterial diambil untuk diagnosis, fakta bahwa patogen "bersembunyi" dalam sel atau fokus peradangan tidak dikecualikan dan tidak dilepaskan di luar.

Sensitivitas metode ini pada anak-anak adalah 25-80%. Sebagai contoh, dalam penelitian acak pada sekelompok pasien dengan diagnosis yang terbukti secara klinis, tes darah PCR untuk tuberkulosis memberi hasil positif hanya pada 50% pasien. Dalam hal ini, ketika menguji anak untuk mikobakteri patogen, tidak mungkin untuk mengganti satu metode diagnostik dengan yang lain. Untuk memverifikasi sepenuhnya tidak adanya infeksi, perlu dilakukan penelitian komprehensif dalam beberapa cara sekaligus.

Proses pengumpulan

Kondisi utama untuk keandalan diagnostik PCR adalah kepatuhan terhadap aturan untuk mengumpulkan cairan biologis untuk dianalisis. Materi yang terkontaminasi atau terkumpul secara tidak tepat dapat menyebabkan hasil yang salah. Yang paling umum adalah analisis dahak, darah dan urin, tetapi untuk diagnosis diferensial yang lebih dalam, Anda dapat mengambil sampel dari isi lambung, cairan sinovial, cairan serebrospinal, cairan flushing bronkus, sperma, sekresi prostat.

PCR urin untuk TBC diambil di pagi hari setelah kebersihan genital eksternal dengan buang air kecil ke dalam wadah steril. Selama prosedur, penting untuk tidak menyentuh dinding bagian dalam wadah untuk mencegah masuknya mikroorganisme pihak ketiga. Wanita yang menjalani kehidupan seks biasa harus memasang tampon di vagina untuk menghindari keluarnya cairan dari pihak ketiga.

Tes darah dilakukan pada pagi hari dengan perut kosong, dan PCR sputum untuk TBC dapat dilakukan kapan saja sepanjang hari dengan kebersihan mulut wajib sebelumnya. Ini diperlukan untuk menghilangkan sisa makanan yang mungkin masuk ke dalam wadah. Ketika mengeluarkan dahak, penting untuk mencegah masuknya air liur dan lendir dari nasofaring ke dalam wadah, ini dapat merusak data analisis.

Studi tentang isi perut dilakukan di rumah sakit di pagi hari, sementara dahak yang tertelan semalaman ada di perut. Untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis, metode ini membuat pembenihan tiga kali lipat, yang kemungkinan besar memungkinkan untuk mengisolasi basil Koch.

Hasil decoding

Analisis kualitatif PCR memberikan 2 jenis hasil "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Mereka menandakan vonis positif dan negatif, masing-masing. Jawaban "terdeteksi" berarti bahwa DNA dari agen infeksi hadir dalam sampel uji, dan dengan kemungkinan 97% tubuh terinfeksi TBC. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya Koch menempel DNA dalam sampel bahan biologis, dan memberikan kemungkinan 97% bahwa tubuh tidak memiliki jumlah besar mikobakteri, dan 60% bahwa orang tersebut tidak terinfeksi.

Spesifisitas terbesar untuk diagnosis TB adalah tes darah dan dahak. Dengan hasil positif, mereka menunjukkan infeksi pada tubuh, yang membutuhkan langkah-langkah terapi yang mendesak. Studi tentang biomaterial lain mungkin mengindikasikan bukan perjalanan penyakit, tetapi hanya keberadaan bakteri asing. Ini terjadi ketika seseorang adalah pembawa penyakit, tetapi tidak menyebarkan infeksi ke lingkungan dan tidak menginfeksi orang sehat.

Analisis PCR kuantitatif dilakukan lebih jarang, dan dokter yang hadir berurusan dengan decoding hasilnya. Indikator penelitian digunakan untuk menentukan aktivitas penyakit dan tingkat kerusakan pada tubuh. Berdasarkan data yang diperoleh, seorang spesialis dapat menentukan efektivitas pengobatan, dan jika perlu, menyesuaikan skema terapeutik.

TBC selalu dan tetap menjadi salah satu masalah paling serius bagi kesehatan seluruh umat manusia. Metode diagnostik modern dapat mendeteksi penyakit pada tahap awal untuk memulai perawatan tepat waktu. Tes tuberkulin, mikroskop apusan, kultur bakteri pada media nutrisi buatan telah membuktikan diri dalam bidang diagnosis laboratorium tuberkulosis. Namun, penantian panjang untuk hasil dan peningkatan frekuensi pembacaan positif palsu membuat mereka usang dan membawa ke depan teknologi yang lebih maju. Analisis PCR adalah metode yang sangat spesifik dan sangat efektif untuk mendiagnosis TB. Hasilnya adalah yang paling dapat diandalkan di antara semua metode laboratorium yang diusulkan untuk mendeteksi tongkat Koch. Hal ini memungkinkan tidak hanya untuk membuat putusan akhir, tetapi juga untuk melakukan diagnosis banding yang diperlukan.

Diagnosis PCR TB pada anak-anak dan orang dewasa: indikasi untuk

Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mengakui 20 tahun lalu bahwa tingkat penyebaran tuberkulosis di luar kendali dan mencapai skala epidemi. Sejak itu, situasinya tidak membaik. Lebih dari satu juta kasus penyakit ini didiagnosis setiap tahun, yang hampir seperempatnya berakibat fatal. Dalam dekade terakhir, tingkat kejadian di kalangan anak-anak telah meningkat, sebagian besar bentuk penyakit ini tidak sesuai dengan terapi antibiotik standar.

Saat ini, salah satu tugas global untuk kedokteran adalah pengembangan metode diagnostik yang memungkinkan untuk mengidentifikasi patologi sebelum timbulnya gejala klinis yang nyata. Salah satunya adalah reaksi rantai polimerase (PCR) untuk TBC, yang membantu mendeteksi tongkat penyebab penyakit Koch dalam darah, dahak, dan cairan biologis lainnya.

Diagnosis TBC

Tes skrining bertujuan untuk mendeteksi pasien, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran infeksi di masyarakat. Untuk anak-anak di bawah usia 14 tahun, tes Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah tes imunologi di mana dosis tuberkulin disuntikkan secara subkutan - campuran kompleks bahan genetik dari beberapa jenis mikobakteri. Munculnya reaksi yang diucapkan menunjukkan proses infeksi yang terjadi secara aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau sinar-x. Metode ini membantu memvisualisasikan lesi patologis pada jaringan paru-paru. Namun, itu menyebabkan kesulitan dalam membedakan TB dari patologi organik lain (neoplasma ganas dan jinak, proses inflamasi, invasi parasit, kerusakan paru-paru profesional).

Untuk memperjelas struktur dan ukuran fokus patologis, studi instrumental tambahan mungkin diperlukan:

• radiografi yang ditargetkan;
• computed tomography;
• pencitraan resonansi magnetik.

Metode untuk diagnosis TB

Dalam hal hasil yang meragukan dan untuk penunjukan terapi yang memadai, ada kebutuhan untuk metode diagnostik yang lebih akurat yang memungkinkan untuk mengisolasi patogen. Pemeriksaan mikroskopis dan bakteriologis dahak digunakan untuk mengkonfirmasi bentuk TB paru untuk waktu yang lama.

Dalam beberapa tahun terakhir, kejadian mikobakterium dari berbagai organ dan sistem - ginjal, tulang, usus, kulit - menjadi lebih sering. Untuk mengidentifikasi bentuk-bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasonografi, kultur urin dan feses, pemeriksaan endoskopi dapat digunakan.

Diagnosis PCR untuk TBC akan membantu mengonfirmasi keberadaan tongkat Koch dalam darah, serta sensitivitasnya terhadap obat-obatan tertentu. Ini adalah metode yang sangat efektif berdasarkan deteksi bahan genetik bakteri dalam berbagai cairan biologis.

Spesifisitas dan indikasi

Reaksi rantai polimerase adalah metode diagnostik mikrobiologis yang sangat sensitif, yang didasarkan pada prinsip-prinsip rekayasa genetika. Untuk mengkonfirmasi keberadaan patogen dalam bahan biologis, cukup untuk mendeteksi fragmen asam nukleat yang unik untuknya. PCR untuk TBC dapat mendeteksi bakteri dalam darah, dahak, urin.

Saat ini, dikembangkan beberapa metode analisis. Yang paling populer di antara mereka adalah sebagai berikut:

• PCR waktu-nyata;
• teknologi mikofluida;
• sequencing dan pyrosequencing.

PCR waktu-nyata

Laboratorium paling sering menggunakan reaksi berantai polimerase waktu-nyata, karena mengurangi jumlah hasil positif palsu, dan proses analisisnya sendiri membutuhkan waktu singkat.

Mengingat sejumlah besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakefektifan metode diagnostik standar, PCR semakin banyak digunakan. Tujuan dari analisis ini ditunjukkan pada:

• mengidentifikasi area yang mencurigakan pada X-ray;
• hasil tes tuberkulin yang meragukan;
• ketidakmungkinan melakukan analisis mikroskopis dan bakteriologis dahak pada orang dalam kondisi serius;
• melakukan intervensi bedah ketika perlu untuk segera memastikan bahwa tidak ada infeksi;
• tidak dapat diterimanya penggunaan fluorografi, x-ray atau computed tomography (misalnya, pada wanita hamil dan menyusui, dalam kasus paparan radiasi berlebih);
• diduga TB luar paru (disarankan agar tidak hanya darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR TBC telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan anak-anak, karena kurangnya paparan tambahan dan hasil yang cepat.

Prosedur persiapan dan analisis

Persiapan khusus untuk PCR darah tidak diperlukan. Namun, untuk menghindari komplikasi pengambilan sampel darah dan untuk mendapatkan bahan berkualitas tinggi, aturan umum berikut harus diikuti:

• analisis harus diambil di pagi hari tidak lebih awal dari 2 jam setelah bangun tidur;
• Seharusnya membatasi asupan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum pengambilan sampel darah;
• jangan makan, teh, dan kopi selama 8-9 jam, diperbolehkan minum air bersih;
• Jangan merokok setidaknya 3-4 jam.

Dalam hal pengobatan permanen (hormon, antikoagulan, obat antiinflamasi, antibiotik, pengencer darah), Anda harus memberi tahu asisten laboratorium tentang hal ini.

Setelah melahirkan dahak, Anda harus menyikat gigi dengan baik dan berkumur beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam wadah steril. Untuk hasil yang lebih baik, obat ekspektoran atau mukolitik dapat dikonsumsi pada malam hari.

Diagnosis itu sendiri terdiri dari beberapa tahap.

Bahan pagar. Itu dapat dilakukan di laboratorium dan dari jarak jauh. Beberapa jenis bahan yang dikumpulkan pasien secara independen (urin, dahak).

Penghancuran struktur asam nukleat (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan uji dipanaskan hingga suhu 98 derajat dan ditahan selama beberapa menit. Akibatnya, heliks ganda terurai, molekul beruntai tunggal terbentuk.

Annealing Setelah menambahkan primer (bagian pendek asam nukleat), suhu menurun beberapa derajat, polimerase diaktifkan.

Pengakuan. Temperatur dibawa ke tingkat optimal, aktivitas enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan sesuai dengan aturan saling melengkapi Chargaff.

Untuk menyelesaikan penelitian ini, perlu mensintesis jumlah molekul DNA yang diperlukan - sekitar 50 siklus reaksi di atas. Dibutuhkan sekitar 2-3 jam. Hasil positif dari reaksi tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan indikator keberadaan mikroorganisme dalam tubuh.

Keuntungan dan kerugian dari metode ini

Dibandingkan dengan metode mikrobiologis lainnya, PCR tidak membutuhkan waktu lama untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari pengujian.

Keuntungan lain adalah spesifisitas tinggi dari analisis, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan patogen dengan akurasi 90-95% di hampir semua biomaterial (darah, urin, tinja, cairan serebrospinal, dahak, pembilasan bronkus).

Namun, ada beberapa kelemahan dari metode ini:

• persentase hasil positif palsu yang agak tinggi (hingga 15%), yang terkait dengan deteksi mikroorganisme tidak hidup;
• dalam beberapa kasus, Anda dapat melewatkan fakta penyakit, karena Mycobacterium tuberculosis sering mengalami mutasi dan perubahan materi genetiknya;
• efisiensi rendah dalam pemeriksaan orang dengan defisiensi imun;
• biaya riset yang tinggi, kebutuhan akan peralatan dan reagen yang mahal.

Apa yang bisa diganti?

Dengan adanya berbagai bentuk infeksi tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih akurat dan pilihan pengobatan, perlu menggabungkan beberapa studi diagnostik:

Analisis wajib untuk anak-anak adalah tes Mantoux. Jika introduksi tuberkulin (bahan genetik mikobakteri) terjadi reaksi yang nyata, dapat diasumsikan infeksi dengan basil tuberkel.

Metode sinar-X dapat digunakan untuk memvisualisasikan fokus patologis. Dalam diagnosis TB luar paru, metode endoskopi digunakan dengan biopsi simultan:

• bronkoskopi membantu mengidentifikasi lesi pada laring, trakea, bronkus;
• kolonoskopi - usus;
• sistouretroskopi - organ sistem kemih;
• histeroskopi - alat kelamin wanita. Metode-metode ini tidak spesifik, untuk membuat diagnosis yang akurat, patogen harus diidentifikasi.

Tes klinis umum akan membantu untuk lebih spesifik menentukan kondisi tubuh. Diperlukan hitung darah lengkap dengan formula leukosit.

Peningkatan jumlah neutrofil dengan penurunan tingkat limfosit dan peningkatan laju sedimentasi eritrosit (ESR) menunjukkan proses inflamasi aktif dari etiologi bakteri. Untuk mengecualikan kerusakan pada organ-organ sistem kemih menggunakan urinalisis umum dan kultur untuk sterilitas.

PCR saat ini tersedia di sebagian besar laboratorium swasta. Ini tidak hanya membutuhkan spesialis berkualifikasi tinggi, tetapi juga peralatan mahal, sejumlah besar reagen. Oleh karena itu, penggunaan metode ini terbatas meskipun akurasi dan spesifisitasnya tinggi.

Analisis PCR untuk diagnosis TBC

Kedokteran tidak pernah berhenti, dan sampai saat ini, kemajuan di bidang kesehatan memungkinkan untuk mendiagnosis dan menyembuhkan banyak penyakit yang sebelumnya tidak terpengaruh. Ada juga penyakit yang tidak dapat dideteksi dengan inspeksi visual. TBC selalu ada di antara mereka. Ini adalah penyakit menular berbahaya yang menyerang paru-paru, persendian, dan tulang, dan seringkali menyebabkan kematian bahkan di zaman kita sekarang. Metode diagnostik untuk penyakit ini telah ditingkatkan, yang memungkinkan untuk mendeteksi penyakit pada tahap-tahap awal ketika itu dapat diobati. Di antara mereka tidak hanya tes X-ray dan Mantoux, tetapi juga PCR untuk TBC.

Tuberkulosis - apa itu?

Sebelumnya, TBC disebut penyakit kering atau phthisis. Ini adalah infeksi bakteri yang paling sering mempengaruhi paru-paru. Bentuk ekstrapulmonernya - tuberkulosis tulang dan sendi, meningitis tuberkulosis - adalah stadium yang lebih jarang dan lebih lanjut. Agen penyebab penyakit menular ini adalah mikobakteri. Basil tuberkulosis juga disebut tongkat Koch.

Infeksi TB sangat menular, ditularkan oleh tetesan udara ketika batuk dan bersin pasien. Satu-satunya perlindungan terhadap penyakit ini adalah pemberian vaksin tepat waktu. Itu tidak melindungi terhadap infeksi, tetapi tidak membiarkan basil masuk ke tubuh untuk menyebabkan TBC.

Bentuk TBC

Penyakit ini dapat terjadi dalam bentuk terbuka dan tertutup. Perbedaannya adalah sebagai berikut:

• TBC tertutup tidak menunjukkan gejala. Dalam keadaan seperti itu, tongkat Koch di dahak tidak mungkin untuk dideteksi, oleh karena itu, yang terinfeksi tidak berbahaya bagi lingkungan. Perjalanan penyakit seperti itu biasanya tidak mengancam yang paling terinfeksi, tetapi ada pengecualian - dalam satu kasus sepuluh, tuberkulosis tertutup mampu menjadi bentuk terbuka;
• dengan bentuk terbuka, mikobakteri yang menyebabkan TBC ditemukan dalam air liur dan dahak pasien. Organisme yang terinfeksi menimbulkan bahaya besar bagi masyarakat, bahkan dalam isolasi. Biasanya, penyakit ini pertama-tama menyerang paru-paru. Jika tidak didiagnosis lebih awal, mungkin ada bentuk lain, seperti TBC tulang atau sendi.

Bentuk terbuka TBC didiagnosis dengan berbagai cara. Pasien menjalani rontgen dada atau rontgen dada, menganalisis bahan biologisnya atau tes kulit Mantoux. Baru-baru ini, metode lain telah muncul yang dianggap sama efektifnya - analisis reaksi berantai polimerase (PCR).

Apa arti PCR?

Dalam praktik medis, metode untuk mendiagnosis penyakit ini atau itu dengan mendeteksi DNA atau RNA-nya dalam tubuh manusia telah lama digunakan. Inilah tepatnya PCR untuk TBC. Ini adalah analisis presisi tinggi dari darah atau cairan biologis lainnya, yang memungkinkan Anda mengidentifikasi bakteri dengan konsentrasi minimum dalam bahan yang dipilih, satu sel saja sudah cukup. Penelitian dilakukan dengan menggunakan enzim polimerase khusus.

Keuntungan dari metode ini

PCR adalah metode diagnostik yang telah menunjukkan dirinya dari sisi terbaik, sehingga cukup sering digunakan, baik dalam kombinasi dengan metode lain maupun secara independen. Keuntungannya:

• ketentuan produksi terpendek. Penelitian dilakukan dengan cepat, dalam waktu sekitar 5 jam menggunakan PCR dapat mendeteksi keberadaan basil tuberkulosis dalam cairan biologis pasien. Ini terutama benar jika Anda perlu melakukan intervensi bedah segera, dan sebelum itu dapatkan diagnosis yang akurat;
• Kebetulan metode diagnostik lain dikontraindikasikan untuk pasien. Sebagai contoh, sinar-X dapat dilakukan tidak berarti semua orang. Selain itu, gambaran tidak selalu memungkinkan untuk membuat diagnosis, terutama jika penyakit ini pada tahap awal. Dengan bantuan metode PCR, patogen terdeteksi segera;
• Cairan biologis setiap pasien cocok untuk analisis. PCR urin dan saliva untuk TBC dilakukan untuk mengidentifikasi bentuk paru dan ekstrapulmoner. Penelitian ini juga dilakukan dengan menggunakan cairan tulang belakang pasien untuk mendeteksi meningitis tuberkulosis.
• Metode ini sangat aman. Untuk melakukan itu, cukup untuk mendapatkan cairan biologis dari pasien. Diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak nyaman dan tidak berbahaya, karena pemeriksaan rontgen hanya diperbolehkan sejak usia 18 tahun, dan tes Mantoux kadang-kadang menyebabkan reaksi yang merugikan;
• PCR adalah analisis yang sangat sensitif. Ini memungkinkan Anda mengidentifikasi tongkat Koch dengan konsentrasi minimum mikobakteri;
• Dengan bantuan enzim polimerase khusus, suatu penyakit didiagnosis pada setiap tahap, dari awal hingga lanjut;
• metode ini efektif dalam mendiagnosis kekambuhan penyakit;
• Metode ini merupakan terobosan dalam membuat diagnosis yang akurat pada tahap awal penyakit. Hal ini memungkinkan Anda untuk memulai perawatan dalam waktu sesingkat mungkin dan menghancurkan patogen, ketika mereka belum memiliki dampak negatif yang tidak dapat dipulihkan pada organ dan sistem tubuh manusia.

Di mana melakukan analisis PCR untuk TBC

Meskipun analisis PCR untuk TBC adalah metode yang sangat efektif untuk mendiagnosis penyakit ini, jarang digunakan sendiri. Sebagai aturan, ini adalah metode tambahan untuk mendeteksi tuberkulosis dan jarang digunakan. Faktanya adalah bahwa metode ini cukup mahal.

Klinik umum tidak memiliki kesempatan untuk membeli peralatan khusus untuk melakukan analisis PCR, dan pemerintah tidak melihat titik dalam membiayai artikel ini, karena TBC dapat didiagnosis dengan cara lain. Studi semacam ini paling sering dilakukan di klinik swasta yang mampu membeli peralatan yang diperlukan.

Kekurangan dari metode ini

Harga tinggi bukan satu-satunya kelemahan PCR. Selain biaya tinggi, metode ini memiliki kekurangan dan kekurangan lainnya, misalnya:

• PCR untuk TBC memberikan hasil positif bahkan setelah perawatan, karena mengambil sel-sel mati sebagai bakteri hidup, oleh karena itu metode ini tidak cocok sebagai pemeriksaan kontrol pasien untuk memastikan kesembuhannya;
• basil tuberkulosis bermutasi, dan DNA mereka dimodifikasi, yang dapat memengaruhi keandalan hasil;
• Tes darah PCR untuk TBC jarang dilakukan, karena keberadaan tongkat Koch dalam cairan biologis ini sangat sulit dideteksi. Ini hanya mungkin pada tahap terakhir atau dalam sepsis. Biasanya, dahak pasien diambil untuk diagnosis;

Perlu dicatat bahwa hasil yang paling akurat adalah tepatnya pengumpulan isi perut pasien. Jika diduga TB paru, biakan dahak akan menjadi cara paling efektif untuk mendiagnosis penyakit tersebut. Jika pasien memiliki bentuk luar paru, maka mungkin tidak ada bakteri di lingkungan bioen ini. Untuk menentukan TBC tulang, sendi, dll menggunakan PCR, cairan biologis lain diperlukan, misalnya, cairan tulang belakang.

Bagaimana PCR untuk TBC?

Seperti dijelaskan sebelumnya, inti dari analisis PCR adalah untuk mengidentifikasi DNA patogen dalam cairan biologis pasien dengan reaksi polimerase. Tahapan utama dari metode ini:

1. Pengambilan sampel bahan biologis. PCR bukan hanya hemotest - biomassa yang diteliti bisa berupa air liur, urin, cairan serebrospinal, cairan pencuci bronkial, isi lambung, dahak.
2. Setelah itu, biomassa terpapar pada suhu tinggi untuk menghancurkan struktur DNA patogen.
3. Kemudian suhu berangsur-angsur berkurang dan primer melekat pada elemen DNA yang hancur.
4. Menurut hasil sintesis molekuler, yang memakan waktu sekitar 30 siklus, strain bakteri patogen tertentu terdeteksi atau tidak ada.

Analisis ini membutuhkan pendanaan yang baik, sehingga PCR tidak sering dilakukan. Namun, metode ini tidak ada bandingannya, ketika opsi diagnostik lainnya dilarang, atau dalam keadaan darurat, ketika tidak ada waktu untuk menunggu hasilnya.

Kesimpulannya

Sebagai kesimpulan, kita dapat menarik kesimpulan berikut:

• PCR adalah analisis yang sangat akurat yang dapat mendeteksi tuberkulosis beberapa hari setelah infeksi;
• analisis ini dilakukan dalam 3,5 - 5 jam, jadi dalam kasus ketika tagihan masuk ke jam, itu tak tergantikan;
• itu adalah metode yang aman yang tidak memiliki efek samping;
• Ini digunakan ketika metode diagnostik lain menunjukkan hasil yang tidak konsisten atau penggunaannya dikontraindikasikan.

Namun, PCR jarang dilakukan, karena ini merupakan analisis mahal yang memerlukan pemasangan peralatan khusus. Selain itu, tidak selalu informatif, jadi para ahli menggunakan metode pendeteksian TB sebagai tambahan.

Analisis PCR (diagnosis) tuberkulosis

Tuberkulosis atau konsumsi - salah satu penyakit menular paling populer di abad ke-21. Patogennya adalah mikrobakteri khusus - stik Koch.

Penyakit ini menyebar tidak hanya ke paru-paru, tetapi juga ke otak, pencernaan, sendi atau tulang belakang, sistem kemih, dan kulit.

Menurut WHO, 10 juta orang menderita TBC setiap tahun, yang 3 juta di antaranya fatal.

Situasi ini sangat menyedihkan di wilayah negara-negara CIS, di sini epidemi TB terjadi secara berkala. Rusia, Kazakhstan, Ukraina dikepalai oleh peringkat yang menyedihkan tentang penyebaran infeksi ini.

Infeksi mudah ditularkan oleh tetesan udara atau melalui sistem pencernaan, mempengaruhi organ vital, dan juga dapat dengan cepat beradaptasi dengan obat polimer dan kemoterapi.

Salah satu faktor utama keberhasilan pengobatan TB adalah deteksi infeksi yang tepat waktu.

Metode diagnostik

Manusia telah menemukan banyak metode untuk mengenali penyakit berbahaya. Diagnosis TBC dibagi menjadi instrumen dan laboratorium.

Dalam kasus pertama, tes darah untuk TBC, serta dahak, urin.

Kelompok kedua adalah penelitian menggunakan sinar-X dan endoskopi. Metode instrumental untuk mendiagnosis TB, pada gilirannya, adalah radiasi dan pembedahan.

Jenis metode radiasi untuk menemukan penyakit

• Fluorografi adalah metode mendiagnosis penyakit yang dikenal oleh setiap penduduk CIS. Dengan menggunakan rontgen, paru-paru dan kelenjar getah bening hilar diperiksa.
• Rontgen dada - mirip dengan fluorografi, tetapi metode yang lebih baik untuk mendeteksi infeksi. Gambar diperoleh secara lebih rinci dan dalam dua proyeksi, tetapi prosedur ini sekitar enam kali lebih mahal. Biasanya digunakan setelah kecurigaan serius dari penyakit muncul.
• Computed tomography dilakukan sebagai diagnosis tambahan, juga digunakan setelah alasan yang baik untuk adanya infeksi.

Metode diagnosis bedah termasuk endoskopi bronkial, serta mediastinoscopy dan thoracocoscopy.

Metode pertama adalah mempelajari pohon bronkial paru-paru dengan bantuan "pemeriksaan" pada organ ini. Dua metode yang tersisa memungkinkan untuk mempelajari bagian pleural paru dengan menusuk dada.

Ketiga metode ini adalah intervensi bedah serius dan paling sering digunakan dalam proses perkembangan penyakit.

Tes laboratorium meliputi:

• Analisis dahak untuk basil tuberkel.
• Pemeriksaan mikroskopis.
• Diagnosis PCR tuberkulosis

Apa itu diagnosis PCR?

Salah satu metode paling canggih dalam diagnosis laboratorium spesialis infeksi adalah reaksi berantai polimerase.

Metode ini dikembangkan oleh ilmuwan terkenal AS Carrie Mullis pada tahun 1983, di mana ia memenangkan Hadiah Nobel.

Analisis PCR adalah isolasi partikel DNA dari dahak, darah, cairan serebrospinal, tinja, dll. untuk biosintesis mereka selanjutnya.

Dengan bantuan studi genetik molekuler yang kompleks, sifat mikroba dalam tubuh pasien ditentukan.

Jenis analisis untuk TB ini dilakukan dalam beberapa tahap:

• Pertama, sampel biologis diambil. Bahan ditempatkan dalam wadah khusus dan dikirim ke laboratorium.
• Di pusat penelitian, analisis dipanaskan hingga 97 derajat. Ini memungkinkan untuk menghancurkan struktur genom DNA mikroorganisme, yang terdiri dari beberapa rantai.
• Suhu secara khusus diturunkan sehingga primer (peserta DNA dari mana proses biosintesis dimulai) dapat terhubung ke rantai asam deoksiribonukleat apa pun.
• Setelah itu, biosintesis molekul yang diperlukan untuk deteksi dilakukan.

Setelah 25-30 siklus berulang dalam proses penelitian laboratorium, dokter memiliki kesempatan untuk mengenali apakah mikroorganisme menular ada di tubuh pasien atau tidak.

Keuntungan dan kerugian

PCR untuk TBC adalah teknik diagnostik paling modern. Metode ini memungkinkan untuk mendeteksi infeksi pada setiap tahap dengan keandalan tinggi. Manfaat:

• Kecepatan - belajar tidak lebih dari lima jam. Hasil tes untuk mikroba tuberkulosis dapat ditemukan dalam waktu 24 jam.
• Keselamatan - Metode PCR tidak memiliki kontraindikasi usia.
• Ketepatan waktu - teknik ini memungkinkan Anda untuk mendeteksi TB pada tahap-tahap tersebut ketika penyakit tidak memiliki gejala.
• Tingkat akurasi yang tinggi - jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam analisis, mereka akan ditemukan menggunakan reaksi berantai polimerase. Juga, teknik ini memungkinkan untuk dengan mudah mengidentifikasi agen penyebab TBC.
• Keserbagunaan - diagnostik digunakan tidak hanya untuk mendeteksi konsumsi, tetapi juga untuk penyakit lain seperti klamidia, gonore, dll.

Meskipun ada banyak keuntungan, penggunaan teknik ini dalam praktik medis domestik adalah pengecualian daripada aturan. Ada sejumlah alasan untuk ini.

Kerugian dari metode ini adalah:

• Tingginya biaya survei.
• Metode ini tidak cocok untuk mereka yang telah menjalani terapi, karena keberadaan bakteri Koch yang mati dapat menyebabkan hasil positif palsu.
• Dalam kasus mutasi mikroorganisme menular, genom mereka tidak dapat dikenali dengan membuat kesimpulan yang salah.
• Penting untuk memilih lingkungan deteksi yang tepat. Misalnya, hasil tes darah untuk PCR untuk tuberkulosis (entri pengenceran) akan negatif jika sistem saraf terinfeksi.
• Tidak selalu mungkin untuk menerapkan metode ini pada pasien yang didiagnosis dengan lesi paru-paru.

Selain itu, analisis tuberkulosis semacam itu membutuhkan peralatan modern yang tidak dimiliki 90 persen rumah sakit. Dalam CIS, analisis tersebut dapat dilakukan oleh jaringan klinik Invitro.

Ketentuan analisis

Rekomendasi untuk pasien yang menjalani tes untuk TB bervariasi tergantung pada jenis analisis yang mereka lewati.

Ketika mengambil darah untuk PCR, perlu untuk berhenti merokok satu jam sebelum prosedur, bagi dua orang untuk berhenti minum minuman beralkohol dan makanan berlemak.

Dianjurkan juga untuk menahan diri dari aktivitas fisik, juga tidak mungkin untuk mengambil darah untuk TBC saat perut kosong.

Saat mengambil swab dari mulut dan rongga hidung, Anda tidak dapat makan 2-4 jam sebelum prosedur, jika tidak maka tidak akan informatif. Juga, jangan minum alkohol.

Untuk pembacaan yang akurat, analisis dilarang merokok lebih awal dari satu jam sebelum prosedur. Pada malam hari, jangan menyikat gigi dan menggunakan semprotan dan semprotan mulut.

Jika Anda mencurigai tuberkulosis pada sistem urogenital, pasien selama 2-3 hari sebelum melahirkan harus mengecualikan seks, selama 2-3 jam sebelum prosedur, jangan pergi ke toilet "dengan cara kecil". Organ genital harus dicuci dengan air putih tanpa alat khusus.

Wanita disarankan untuk tidak menggunakan tablet vagina, lilin, bola, dan juga untuk menahan diri dari pengujian pada hari-hari kritis.

5 hari sebelum melahirkan, hasilnya perlu untuk meninggalkan prosedur kolposkopi, serta USG transvaginal,

Kapan diagnostik PCR digunakan?

Tidak setiap klinik memiliki diagnosis yang sedemikian kompleks, tetapi dokter semakin menggunakan metode penelitian seperti itu. Biasanya analisis semacam ini dilakukan dalam situasi khusus.

• Dalam hal hasil manta yang meragukan, tes darah untuk TBC dapat digunakan.
• Dalam kasus di mana pasien telah melakukan kontak dengan orang yang terinfeksi, tetapi dokter yang hadir tidak dapat secara akurat menentukan diagnosis.
• Dalam kasus operasi darurat, ketika itu perlu untuk mengetahui dalam waktu singkat apakah pasien memiliki infeksi ini.
• Ketika seorang pasien hamil, ketika metode penelitian lain tidak cukup aman untuk bayi yang baru lahir.

Perlu dicatat bahwa diagnosis ini direkomendasikan untuk anak-anak karena keamanannya.

Jika seorang siswa memiliki kontraindikasi terhadap tes TBC, ia dapat mengambil tes darah untuk TBC alih-alih mantel dengan PCR.

Analisis PCR untuk TBC

Analisis PCR untuk TBC adalah yang paling populer di antara penelitian medis di bidang penyakit ini.

Tapi bagaimana cara memperingatkan diri sendiri dan orang yang Anda cintai dari penyakit mengerikan ini? Bagaimana cara lulus tes yang diperlukan untuk PCR?

Gejala TBC dan pencegahannya

Para ahli mengatakan bahwa sekitar 30% dari total populasi menderita TBC.

Persentase tertinggi penyakit ini dikembangkan di negara-negara yang belum berkembang. Ini paling sering terjadi sebagai akibat berkurangnya kekebalan pada manusia.

Penyakit ini adalah salah satu yang tertua. Penyakit ini dapat ditemukan di lapisan otak, di saluran pencernaan, di sendi dan tulang belakang, di sistem kemih dan di area kecil di kulit manusia.

Para ahli paling mudah menentukan kulit yang terkena. Di situs ada segel kecil, yang seiring waktu ukurannya bertambah, pecah dengan cairan keputihan.

Agen penyebab TBC paling sering dapat diambil ketika berbicara dengan orang yang sakit, ketika mereka batuk atau bersin. Biasanya, penyakit ini berlanjut tanpa gejala atau memiliki bentuk terbuka, tetapi diagnosis PCR tentang tuberkulosis memungkinkannya untuk dideteksi pada tahap awal dan dalam kasus darurat.

Gejala penyakit: batuk basah berkepanjangan, demam, menggigil, berkeringat berlebihan di malam hari, penurunan berat badan yang tajam, perasaan lelah dan lemah.

Bentuk terbuka dari penyakit ini adalah yang paling berbahaya. Seseorang yang menderita TBC dapat menginfeksi orang sehat.

Gejala terpenting penyakit paru adalah hemoptisis. Itu terjadi dalam segala bentuk penyakit.

Dalam beberapa situasi, ini dapat menyebabkan pendarahan dari paru-paru seseorang. Ini sangat berbahaya dan membutuhkan intervensi medis yang mendesak.

Untuk pencegahan dan pengenalan TBC, para ahli meresepkan: sampel - tes TBC, pemeriksaan bahan biologis, fluorografi, sinar-X dan tes darah, dahak atau air liur.

Diagnosis penyakit

Diagnosis penyakit yang diperbaiki - ini adalah benar dan selama perawatan dimulai. Dalam kebanyakan kasus, metode yang biasa untuk mendeteksi patogen tidak selalu memiliki efek dan sudah usang.

Cara paling penting untuk mengidentifikasi dan mendiagnosis penyakit paru adalah tes pemeriksaan medis. Biasanya menggunakan diagnostik PCR. Survei ini ditemukan baru-baru ini, pada tahun 1983, oleh ahli biokimia Amerika, Mullis.

Tes pada pasien dengan tuberkulosis paru dilakukan secara eksklusif dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk menegakkan diagnosis atau tidak mungkin untuk mendeteksi penyakit dengan cara instrumental.

Reaksi berantai polimerase adalah metode PCR yang andal. Analisis ini memungkinkan untuk menentukan agen penyebab berapa banyak dalam darah, urin dan cairan sumsum tulang belakang. Pemeriksaan medis semacam itu adalah yang paling aman.

Analisis PCR memberikan hasil 100%.

Ini memiliki sensitivitas tinggi, yang membantu mengenali penyakit untuk pertama kalinya setelah infeksi, sebelum gejala penyakit muncul. Metode analisis ini memberikan hasil dalam beberapa jam setelah pengiriman bahan biologis. Penaburan analisis ini dilakukan tiga kali, tetapi aspirasi perut yang sakit hanya dilakukan di rumah sakit.

Tiga kriteria dikembangkan untuk menentukan hasil: akurasi tinggi, sensitivitas hingga 90%, spesifisitas.

Tes untuk PCR digunakan dalam beberapa kasus:

1. untuk mendiagnosis TB paru;
2. menentukan sumber penyakit;
3. definisi lokalisasi ekstrapulmoner;
4. diagnosis kekambuhan.

Mengevaluasi hasilnya, dan meresepkan perawatan medis yang benar, hanya dapat spesialis. Sangat penting untuk menetapkan skema perawatan medis yang benar untuk mendeteksi TB, perlu melakukan tes untuk kerentanan patogen terhadap perangkat anti-TB.

Berbagai tes kesehatan TBC

Anda dapat mengambil analisis yang diperlukan dalam dua cara: mengambil darah atau air liur dari seseorang atau mengambil dahak.

Tes darah oleh PCR dapat dari dua jenis: ELISA dan PCR. Studi semacam itu membantu memantau keefektifan perawatan medis.

ELISA membantu menemukan antibodi dalam tubuh manusia yang melawan mikroba TBC. Penelitian ini dilakukan sekali sehari. Kerugian utama adalah sensitivitasnya yang rendah, yang memungkinkan untuk menentukan hanya penyakit dengan tingkat infeksi yang rendah.

Penelitian yang paling populer dan efektif adalah analisis pada mycobacterium tuberculosis. Dengannya, dokter dapat dengan mudah menemukan DNA bakteri dalam darah manusia. Metode ini juga digunakan untuk menentukan jumlah bakteri, untuk mengontrol perawatan pasien, untuk mendeteksi kekambuhan dini.

Air liur PCR adalah salah satu metode penelitian paling maju. Analisis semacam itu akan membantu mengidentifikasi bakteri menular dalam saliva. Menggunakan PCR meningkatkan jumlah fragmen DNA dari mikroba berbahaya.

Metode kultur dimaksudkan untuk pemeriksaan sputum manusia, untuk mendeteksi mikrobakteri.

Mempersiapkan pengujian PCR

Perhatian, Anda membutuhkan persiapan air liur yang benar untuk PCR. Jika semua resep tidak diikuti, analisis mungkin positif palsu.

Sebelum mengikuti tes, dilarang merokok, minum makanan dan obat-obatan, serta mengonsumsi alkohol selama 12 jam. Dilarang menyikat gigi, Anda tidak bisa menggunakan alat pembilas, penyegar mulut dan benang gigi.

Dilarang menggunakan lipstik dan memasuki hubungan intim. Diizinkan membilas mulut Anda dengan air matang biasa;

Pemeriksaan ini akan membantu mengidentifikasi: herpes, klamidia, tuberkulosis, patogen pneumonia, oncovirus, barolleosis, mononukleosis, HIV, hepatitis dari semua jenis, rubella.

Analisis untuk mikobakteri terutama dilakukan dalam kasus kontroversial, yaitu jika sulit untuk membuat diagnosis atau ada kontak dengan pasien dengan TBC, sebelum memulai operasi, untuk mendeteksi penyakit. Digunakan untuk pemeriksaan wanita hamil, karena metode ini paling aman untuk ibu dan janin.

Kadang-kadang analisis dilakukan di klinik swasta, karena pasien tidak mematuhi aturan untuk pengujian, tetapi pada saat yang sama dia khawatir tentang semua gejalanya. Analisis dapat dilakukan ketika spesialis tidak yakin setelah melakukan tes Mantoux atau pasien adalah anak-anak.

Keuntungan dan kerugian dari tes medis untuk penentuan TBC

PCR adalah cara paling populer dan efektif untuk menentukan penyakit.

Perbedaan terbesar dari penelitian lain adalah hasil yang cepat dan akurat.

Keuntungan dari pemeriksaan medis ini adalah dapat dilakukan untuk penelitian urologis, ginekologi, onkologis, infeksi, hematologi, paru, gastroenterologis dan lainnya.

Keuntungan utama dari studi medis tersebut adalah bahwa tes darah, dahak dan air liur siap dalam waktu singkat (akan membutuhkan 5 jam untuk mendeteksi penyakit). Pemeriksaan medis semacam itu memungkinkan dilakukannya tes ketika metode tertentu mempelajari suatu penyakit dilarang atau tidak dapat diakses. Bagus untuk mendeteksi kekambuhan pada manusia.

Berkat analisis ini, menjadi mungkin untuk melakukan penelitian untuk lingkungan biologis apa pun. Itu diperbolehkan untuk mengambil materi dari anak-anak. PCR memungkinkan untuk mengidentifikasi agen penyebab pada setiap tahap penyakit. Karena sensitivitasnya yang tinggi, mikroba dapat ditemukan walaupun hanya sedikit bakteri yang ada.

Metode PCR memperluas kemampuannya. Ini juga digunakan untuk menentukan ayah, untuk pembuatan gen baru, mutasi, untuk melintasi elemen DNA, dan sebagainya.

Kerugian dari penelitian ini adalah metode survei yang mahal.

Setelah perawatan medis, tes darah dapat menunjukkan adanya patogen hidup atau mati dalam jumlah kecil, setelah pemeriksaan medis, itu akan memberikan hasil positif.

Bakteri dan mikroba dapat mengalami mutasi, setelah itu PCR tidak akan dapat mengidentifikasi dan mengidentifikasi mereka, oleh karena itu, hanya seorang spesialis yang dapat meresepkan studi tentang lingkungan yang diperlukan, jika tidak, pemeriksaan medis semacam itu tidak akan efektif.

Setelah pengujian, ada hasil negatif, tetapi ini tidak mengecualikan kemungkinan seseorang terinfeksi TBC. Pemeriksaan medis semacam itu dilakukan untuk pasien dengan penyakit paru-paru yang parah, ketika studi lain tidak memberikan hasil yang akurat. PCR akan bermanfaat bagi penderita TB paru dan luar paru.

Sayangnya, peralatan medis untuk mendeteksi patogen tuberkulosis sangat mahal.

Rumah sakit umum dan klinik tidak mampu, tetapi klinik berbayar mengambil tes pasien dan memberikan hasil yang siap pakai dalam waktu singkat.

Diagnosis PCR tuberkulosis

TBC adalah infeksi spesifik, fokusnya mungkin pada jaringan manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronis yang rejimen pengobatan optimalnya sulit dipilih. Salah satu alasan untuk ini adalah keterlambatan diagnosis, ketika mikobakteri, sementara di tubuh manusia, telah beradaptasi dengan banyak obat.

Apa metode diagnosis modern yang ada? Diagnosis PCR - apa itu? Bagaimana penelitian ini dilakukan? Dalam kasus apa TBC didiagnosis dengan metode ini dan apa esensinya?

Apa itu diagnosa PCR

Ini adalah salah satu metode paling modern untuk mendiagnosis tidak hanya penyakit, tetapi juga deteksi bahan biologis. Diagnosis PCR ditemukan relatif baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang ahli biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mengusulkan skema pemulihan yang kompleks untuk bahan biologis mikroorganisme dalam satu segmen pendek. Berkat penemuannya, ilmuwan dianugerahi penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Apa itu - PCR diagnosis infeksi? Polymerase chain reaction (PCR) adalah diagnosis deteksi penyakit virus, berdasarkan metode rekayasa genetika. Ini banyak digunakan dalam mikrobiologi medis, imunologi dan virologi. Metode ini bersifat universal dan membantu membuat diagnosis dengan sejumlah kecil bahan. Infeksi dapat dideteksi secara harfiah pada jam-jam pertama infeksi itu, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Metode ini terdiri dari memperoleh dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi fragmen genom (partikel DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya ke kelas mikroorganisme mana materi genetik yang diperoleh dimiliki dengan menggunakan metode genetik molekuler.

Terlepas dari kenyataan bahwa ini adalah proses yang kompleks, butuh waktu jauh lebih sedikit daripada banyak metode biologis untuk mendeteksi agen infeksi. Hanya dalam beberapa jam, mikroorganisme dapat dideteksi oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengisolasinya dari lingkungan (darah, cairan serebrospinal, sputum) dan menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi buatan. Sudah cukup bahwa fragmen kecil untai DNA dari agen infeksi hadir dalam bahan yang diteliti.

Dasar dari reaksi adalah kemungkinan di bawah kondisi buatan (in vitro) untuk membuat sintesis molekul asam nukleat dari agen infeksi.

Apa yang dibutuhkan untuk PCR?

1. Primer adalah segmen DNA dari mana biosintesis atau penciptaan dimulai.
2. Nukleotida atau senyawa kompleks yang menjadi dasar molekul DNA atau RNA.
3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin terjadi tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahapan diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekuler dilakukan oleh PCR? Prosedurnya sederhana dan membutuhkan waktu singkat, dengan mempertimbangkan pengumpulan materi.

1. Sebelum memulai penelitian, mereka mengambil bahan biologis yang diperlukan - ini adalah air cuci bronkial, darah, isi lambung, dahak. Jenis bahan biologis tergantung pada patogen yang dicurigai.
2. Denaturasi atau penghancuran struktur primer DNA, yang terdiri dari dua rantai. Inti dari tahap ini adalah untuk memisahkan dua sirkuit di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang berlangsung tidak lebih dari dua menit).
3. Pada tahap PCR berikutnya, yang disebut anil, suhu berkurang beberapa derajat sehingga primer akan mengikat untai DNA.
4. Perpanjangan, di mana sintesis molekul yang diinginkan berlangsung secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 siklus yang menerima jumlah salinan DNA mikroorganisme yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Apakah PCR memerlukan diagnosis TB?

Tidak mungkin bagi semua orang yang dicurigai tuberkulosis untuk melakukan PCR, karena metode ini membutuhkan peralatan yang mahal. Tidak semua klinik umum mampu membelinya. Selain itu, kebetulan bahwa metode biasa dalam mendiagnosis infeksi pada kebanyakan kasus juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

• survei pasien, anamnesis;
• pemeriksaan lengkap dari orang tersebut;
• sebuah studi menggunakan tes tuberkulin Mantoux;
• radiografi atau fluorografi;
• diagnostik komputer jika perlu;
• metode penelitian mikrobiologis: pemeriksaan mikroskopik dan pemeriksaan bakteriologis dahak.

PCR untuk TBC dilakukan dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental lainnya.

Meskipun ada banyak metode diagnostik, kejadian TB terus bertambah. Saat ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga fitur lainnya:

• penyakit ini sering terjadi dalam bentuk yang parah;
• jumlah kasus fatal meningkat;
• semakin resisten terhadap kemoterapi modern didiagnosis bentuk penyakit.

Keengganan orang itu sendiri untuk menjalani pemeriksaan medis rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi mengarah pada penyebaran tuberkulosis. Dalam kondisi seperti itu, kita memerlukan metode penelitian yang cepat, informatif dan efektif yang harus dapat diakses oleh anak-anak dan orang dewasa. Semua metode diagnostik di atas jauh lebih rendah daripada PCR.

Manfaat mendiagnosis TB dengan PCR

Penelitian ini, meskipun baru, telah membuktikan dirinya dengan baik, terutama dalam kasus kontroversial di mana tidak mungkin untuk membuat diagnosis karena sejumlah alasan.

Berkat PCR, jauh lebih mudah untuk mendeteksi agen penyebab TBC dalam bahan uji.

Keuntungan dari diagnosa PCR adalah sebagai berikut.

1. Ini adalah analisis cepat. Sebuah fragmen kecil dari molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi darurat ketika, misalnya, sebelum operasi perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit dengan TBC.
2. Analisis PCR diperbolehkan jika metode lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mendeteksi TB paru, kadang-kadang Anda harus mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi radiasi dosis besar).
3. Dengan bantuan PCR, setiap lingkungan biologis diperiksa untuk mengetahui adanya patogen di dalamnya. Misalnya, Anda dapat melakukan penelitian cairan serebrospinal, jika ada kecurigaan meningitis tuberkulosis.
4. Diizinkan diagnosis PCR penyakit menular pada anak-anak, karena metode ini aman.
5. Memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen pada setiap tahap penyakit.
6. Sensitivitas PCR yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, bahkan jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam bahan biologis.
7. Adalah baik untuk melakukan diagnosis kekambuhan penyakit.

Setelah semua membaca PCR tampaknya metode diagnostik yang hampir sempurna, yang harus membuat semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka harus diperhitungkan.

Kekurangan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Saat ini, diagnostik semacam itu lebih jarang terjadi daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasannya.

1. Ini adalah metode penelitian yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak ada karena biayanya yang tinggi, tetapi analisis masih dapat dilakukan di laboratorium berbayar.
2. Segera setelah perawatan, mikobakteri mati atau hidup dalam jumlah kecil mungkin masih ada dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif selama diagnosa PCR), sehingga metode ini tidak dapat diandalkan saat ini, tidak masuk akal untuk melakukannya.
3. Mutasi mikobakteri menyebabkan PCR tidak efektif - urutan untai DNA normal tidak dapat disintesis.
4. Penting untuk memilih lingkungan yang tepat untuk penelitian, darah diambil hanya jika diduga terinfeksi (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada masalah tuberkulosis organ sistem saraf. Dalam hal ini, PCR tidak akan dapat mendeteksi patogen dan diagnosis tidak akan informatif.

Indikasi untuk mendeteksi TB menggunakan analisis PCR

Diagnosis PCR tuberkulosis dilakukan paling sering pada kasus kontroversial. Kapan dokter merujuk penelitian ini?

1. Jika sulit untuk membuat diagnosis menggunakan metode yang tersedia biasa, tetapi ada kontak dengan pasien dengan TBC.
2. Dalam kasus ketika seseorang tidak dapat dikirim ke klinik untuk menjalani tes rutin rutin untuk TB, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan PCR, karena dahak untuk tes dapat dikirim dalam toples dan diagnosa dikonfirmasi dalam beberapa jam.
3. Jika seseorang akan menjalani operasi darurat dan sangat mendesak untuk mengetahui apakah dia sakit TBC.
4. Jika perlu, seorang wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa TBC menggunakan PCR, karena metode ini aman.
5. Pada basis berbayar, siapa pun yang belum didiagnosis dengan TB telah dikonfirmasi menggunakan metode bakteriologis dan fluoroskopi. Hal ini terjadi ketika lesi di paru-paru tidak terlihat dalam gambar langsung, dan orang selama pengiriman dahak untuk penelitian tidak dapat mengikuti rekomendasi untuk pengumpulan bahan yang benar. Dalam hal ini, orang tersebut khawatir tentang semua gejala karakteristik TB paru.
6. Ketika ada keraguan tentang hasil tes Mantoux.
7. Lebih disukai untuk melakukan diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak. Prosedur ini aman, tidak menciptakan paparan radiasi tambahan, dan efektif dalam mendeteksi bentuk penyakit yang sulit didiagnosis.

Diagnosis tuberkulosis yang tepat waktu adalah kunci untuk perawatan yang diresepkan dengan benar dan mengurangi penyebaran penyakit. Seringkali, metode deteksi penyakit yang sudah dikenal tidak selalu efektif. Oleh karena itu, PCR saat ini adalah salah satu cara yang paling dapat diandalkan dan aman untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal perkembangannya.