Diagnosis PCR TB pada anak-anak dan orang dewasa: indikasi untuk

Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mengakui 20 tahun lalu bahwa tingkat penyebaran tuberkulosis di luar kendali dan mencapai skala epidemi. Sejak itu, situasinya tidak membaik. Lebih dari satu juta kasus penyakit ini didiagnosis setiap tahun, yang hampir seperempatnya berakibat fatal. Dalam dekade terakhir, tingkat kejadian di kalangan anak-anak telah meningkat, sebagian besar bentuk penyakit ini tidak sesuai dengan terapi antibiotik standar.

Saat ini, salah satu tugas global untuk kedokteran adalah pengembangan metode diagnostik yang memungkinkan untuk mengidentifikasi patologi sebelum timbulnya gejala klinis yang nyata. Salah satunya adalah reaksi rantai polimerase (PCR) untuk TBC, yang membantu mendeteksi tongkat penyebab penyakit Koch dalam darah, dahak, dan cairan biologis lainnya.

Diagnosis TBC

Tes skrining bertujuan untuk mendeteksi pasien, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran infeksi di masyarakat. Untuk anak-anak di bawah usia 14 tahun, tes Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah tes imunologi di mana dosis tuberkulin disuntikkan secara subkutan - campuran kompleks bahan genetik dari beberapa jenis mikobakteri. Munculnya reaksi yang diucapkan menunjukkan proses infeksi yang terjadi secara aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau sinar-x. Metode ini membantu memvisualisasikan lesi patologis pada jaringan paru-paru. Namun, itu menyebabkan kesulitan dalam membedakan TB dari patologi organik lain (neoplasma ganas dan jinak, proses inflamasi, invasi parasit, kerusakan paru-paru profesional).

Untuk memperjelas struktur dan ukuran fokus patologis, studi instrumental tambahan mungkin diperlukan:

• radiografi yang ditargetkan;
• computed tomography;
• pencitraan resonansi magnetik.

Metode untuk diagnosis TB

Dalam hal hasil yang meragukan dan untuk penunjukan terapi yang memadai, ada kebutuhan untuk metode diagnostik yang lebih akurat yang memungkinkan untuk mengisolasi patogen. Pemeriksaan mikroskopis dan bakteriologis dahak digunakan untuk mengkonfirmasi bentuk TB paru untuk waktu yang lama.

Dalam beberapa tahun terakhir, kejadian mikobakterium dari berbagai organ dan sistem - ginjal, tulang, usus, kulit - menjadi lebih sering. Untuk mengidentifikasi bentuk-bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasonografi, kultur urin dan feses, pemeriksaan endoskopi dapat digunakan.

Diagnosis PCR untuk TBC akan membantu mengonfirmasi keberadaan tongkat Koch dalam darah, serta sensitivitasnya terhadap obat-obatan tertentu. Ini adalah metode yang sangat efektif berdasarkan deteksi bahan genetik bakteri dalam berbagai cairan biologis.

Spesifisitas dan indikasi

Reaksi rantai polimerase adalah metode diagnostik mikrobiologis yang sangat sensitif, yang didasarkan pada prinsip-prinsip rekayasa genetika. Untuk mengkonfirmasi keberadaan patogen dalam bahan biologis, cukup untuk mendeteksi fragmen asam nukleat yang unik untuknya. PCR untuk TBC dapat mendeteksi bakteri dalam darah, dahak, urin.

Saat ini, dikembangkan beberapa metode analisis. Yang paling populer di antara mereka adalah sebagai berikut:

• PCR waktu-nyata;
• teknologi mikofluida;
• sequencing dan pyrosequencing.

PCR waktu-nyata

Laboratorium paling sering menggunakan reaksi berantai polimerase waktu-nyata, karena mengurangi jumlah hasil positif palsu, dan proses analisisnya sendiri membutuhkan waktu singkat.

Mengingat sejumlah besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakefektifan metode diagnostik standar, PCR semakin banyak digunakan. Tujuan dari analisis ini ditunjukkan pada:

• mengidentifikasi area yang mencurigakan pada X-ray;
• hasil tes tuberkulin yang meragukan;
• ketidakmungkinan melakukan analisis mikroskopis dan bakteriologis dahak pada orang dalam kondisi serius;
• melakukan intervensi bedah ketika perlu untuk segera memastikan bahwa tidak ada infeksi;
• tidak dapat diterimanya penggunaan fluorografi, x-ray atau computed tomography (misalnya, pada wanita hamil dan menyusui, dalam kasus paparan radiasi berlebih);
• diduga TB luar paru (disarankan agar tidak hanya darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR TBC telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan anak-anak, karena kurangnya paparan tambahan dan hasil yang cepat.

Prosedur persiapan dan analisis

Persiapan khusus untuk PCR darah tidak diperlukan. Namun, untuk menghindari komplikasi pengambilan sampel darah dan untuk mendapatkan bahan berkualitas tinggi, aturan umum berikut harus diikuti:

• analisis harus diambil di pagi hari tidak lebih awal dari 2 jam setelah bangun tidur;
• Seharusnya membatasi asupan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum pengambilan sampel darah;
• jangan makan, teh, dan kopi selama 8-9 jam, diperbolehkan minum air bersih;
• Jangan merokok setidaknya 3-4 jam.

Dalam hal pengobatan permanen (hormon, antikoagulan, obat antiinflamasi, antibiotik, pengencer darah), Anda harus memberi tahu asisten laboratorium tentang hal ini.

Setelah melahirkan dahak, Anda harus menyikat gigi dengan baik dan berkumur beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam wadah steril. Untuk hasil yang lebih baik, obat ekspektoran atau mukolitik dapat dikonsumsi pada malam hari.

Diagnosis itu sendiri terdiri dari beberapa tahap.

Bahan pagar. Itu dapat dilakukan di laboratorium dan dari jarak jauh. Beberapa jenis bahan yang dikumpulkan pasien secara independen (urin, dahak).

Penghancuran struktur asam nukleat (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan uji dipanaskan hingga suhu 98 derajat dan ditahan selama beberapa menit. Akibatnya, heliks ganda terurai, molekul beruntai tunggal terbentuk.

Annealing Setelah menambahkan primer (bagian pendek asam nukleat), suhu menurun beberapa derajat, polimerase diaktifkan.

Pengakuan. Temperatur dibawa ke tingkat optimal, aktivitas enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan sesuai dengan aturan saling melengkapi Chargaff.

Untuk menyelesaikan penelitian ini, perlu mensintesis jumlah molekul DNA yang diperlukan - sekitar 50 siklus reaksi di atas. Dibutuhkan sekitar 2-3 jam. Hasil positif dari reaksi tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan indikator keberadaan mikroorganisme dalam tubuh.

Keuntungan dan kerugian dari metode ini

Dibandingkan dengan metode mikrobiologis lainnya, PCR tidak membutuhkan waktu lama untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari pengujian.

Keuntungan lain adalah spesifisitas tinggi dari analisis, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan patogen dengan akurasi 90-95% di hampir semua biomaterial (darah, urin, tinja, cairan serebrospinal, dahak, pembilasan bronkus).

Namun, ada beberapa kelemahan dari metode ini:

• persentase hasil positif palsu yang agak tinggi (hingga 15%), yang terkait dengan deteksi mikroorganisme tidak hidup;
• dalam beberapa kasus, Anda dapat melewatkan fakta penyakit, karena Mycobacterium tuberculosis sering mengalami mutasi dan perubahan materi genetiknya;
• efisiensi rendah dalam pemeriksaan orang dengan defisiensi imun;
• biaya riset yang tinggi, kebutuhan akan peralatan dan reagen yang mahal.

Apa yang bisa diganti?

Dengan adanya berbagai bentuk infeksi tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih akurat dan pilihan pengobatan, perlu menggabungkan beberapa studi diagnostik:

Analisis wajib untuk anak-anak adalah tes Mantoux. Jika introduksi tuberkulin (bahan genetik mikobakteri) terjadi reaksi yang nyata, dapat diasumsikan infeksi dengan basil tuberkel.

Metode sinar-X dapat digunakan untuk memvisualisasikan fokus patologis. Dalam diagnosis TB luar paru, metode endoskopi digunakan dengan biopsi simultan:

• bronkoskopi membantu mengidentifikasi lesi pada laring, trakea, bronkus;
• kolonoskopi - usus;
• sistouretroskopi - organ sistem kemih;
• histeroskopi - alat kelamin wanita. Metode-metode ini tidak spesifik, untuk membuat diagnosis yang akurat, patogen harus diidentifikasi.

Tes klinis umum akan membantu untuk lebih spesifik menentukan kondisi tubuh. Diperlukan hitung darah lengkap dengan formula leukosit.

Peningkatan jumlah neutrofil dengan penurunan tingkat limfosit dan peningkatan laju sedimentasi eritrosit (ESR) menunjukkan proses inflamasi aktif dari etiologi bakteri. Untuk mengecualikan kerusakan pada organ-organ sistem kemih menggunakan urinalisis umum dan kultur untuk sterilitas.

PCR saat ini tersedia di sebagian besar laboratorium swasta. Ini tidak hanya membutuhkan spesialis berkualifikasi tinggi, tetapi juga peralatan mahal, sejumlah besar reagen. Oleh karena itu, penggunaan metode ini terbatas meskipun akurasi dan spesifisitasnya tinggi.

Analisis PCR untuk TBC

Dalam kasus penyakit yang dicurigai, lebih baik segera lulus analisis PCR untuk TBC. Selama penelitian ini, darah diambil, yang diperiksa di bawah mikroskop. Reaksi rantai polimer semakin mulai menggantikan tes Mantoux untuk mendeteksi TB.

Keuntungan dari metode ini

Analisis ini setelah beberapa jam menentukan keberadaan patogen. Selain itu, jika sejumlah kecil bakteri ada dalam tubuh, metode ini masih akan dapat mengidentifikasi mereka.

Keuntungan utama dari tes PCR adalah poin positif berikut:

1. Penyakit ini terdeteksi pada 100% kasus.
2. Spesifisitas DNA kantor tinggi.
3. Analisis mengungkapkan agen penyebab dalam 4-4,5 jam.
4. TBC paru berhasil didiagnosis, dengan metode lain tidak dapat mengatasinya.
5. Kemampuan untuk mendeteksi fragmen tertentu, yang terkandung dalam patogen ini.

Reaksi rantai polimer memungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi agen penyebab pada waktu yang tepat dan untuk memulai perawatan pasien, itu juga memungkinkan waktu untuk mengisolasi seseorang dari masyarakat jika terjadi infeksi. Tongkat Koch - agen penyebab TBC - dapat ditemukan di mana saja di dalam tubuh. Dan hanya analisis PCR yang memungkinkan untuk mengidentifikasinya di lokasi.

Studi PCR juga memberikan kesempatan untuk memilih obat tergantung pada sensitivitas mikroorganisme.

Deskripsi penyakit

Pada abad kesembilan belas, TBC disebut konsumsi. Penyakit ini adalah infeksi pada organ internal, terutama paru-paru. TBC ditularkan melalui bersin dan batuk di udara. Objek infeksi dapat berupa manusia dan hewan.

Setelah penetrasi bakteri TBC ke dalam tubuh, penyakit ini bisa bertahan lama dalam bentuk laten.

Tergantung pada tingkat paparan orang sakit kepada orang lain, 2 bentuk penyakit ini dibedakan:

1. Bentuk TBC tertutup. Itu tidak berbahaya, karena manusia tidak dapat menginfeksi orang lain. Bahkan dalam analisis, termasuk. dan PCR, penyakit mikobakterium tidak terdeteksi. Tapi tetap saja bahaya ada dalam bentuk ini, karena kapan saja formulir tertutup dapat dibuka. Bentuk TB aktif semacam itu bisa berbahaya tidak hanya bagi pasien itu sendiri, tetapi juga bagi orang-orang di sekitarnya.
2. Bentuk infeksi terbuka. Ketika berada dalam cairan biologis seseorang, tongkat Koch terdeteksi. Seorang pasien dengan TBC pada tahap ini membawa ancaman khusus kepada orang-orang di sekitarnya. Anda dapat terinfeksi bahkan jika pembawa memantau dengan hati-hati dalam hal kebersihan.

Metode penelitian yang paling umum digunakan untuk mengidentifikasi penyakit ini meliputi:

1. Fluorografi.
2. Tomografi dada atau area yang terkena lainnya.
3. Studi radiografi.
4. Studi tentang bahan biologis pasien.
5. Tes tuberkulin (Mantoux).

Analisis genetik molekuler dari reaksi berantai polimerase - PCR diagnosis tuberkulosis adalah salah satu cara paling efektif untuk mendeteksi basil Koch.

Investigasi TBC

Reaksi rantai polimerase adalah analisis genetik molekuler yang paling akurat. Jika infeksi dengan infeksi tuberkulosis telah terjadi, tes polimer penelitian ini memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi DNA atau RNA patogen secara akurat. Untuk melakukan ini, sumbangkan darah atau cairan biologis lainnya.

Untuk menentukan keberadaan TBC, jumlah bakteri minimal sudah cukup, bahkan 1 sel akan melakukannya.

Manfaat lain dari diagnostik PCR meliputi:

1. Ketika melakukan analisis ini, enzim khusus digunakan, berkat keberadaan infeksi TB yang terdeteksi.
2. Analisis PCR sangat sensitif terhadap infeksi mikobakterium, sehingga akurasi diagnostik setara dengan hampir 100%.
3. Sudah setelah 3,5-5,5 jam setelah tes dilakukan, akan mungkin untuk mengetahui hasil analisis.

Dengan penyakit seperti TBC, sangat penting untuk mengidentifikasi patologi pada tahap awal. Oleh karena itu, tes untuk reaksi berantai polimerase adalah yang paling informatif dalam kasus ini. Ketika bakteri baru mulai menyerang, mereka harus dideteksi sedini mungkin, sampai dampaknya mempengaruhi fungsi vital organ dalam.

Analisis PCR memiliki keunggulan lain dibandingkan jenis penelitian lain: teknik ini menentukan sensitivitas mikroorganisme terhadap obat tertentu, yang memungkinkan terapi menjadi paling efektif.

Mempersiapkan pengujian PCR

Jika air liur mengalah, persiapan untuk ini diperlukan. 12 jam sebelum prosedur, Anda harus berhenti merokok, alkohol, obat-obatan, dan makanan. Menyikat gigi, berkumur dengan berbagai penyegar, dan bahkan membersihkan benang gigi pun dilarang. Juga, Anda tidak dapat menggunakan lipstik dan menjalani kehidupan seks. Hal ini diperlukan untuk membilas rongga mulut dengan air matang.

Tidak hanya TBC terdeteksi oleh metode PCR. Dengan cara yang sama, penyakit yang tidak kalah serius seperti herpes, klamidia, mononukleosis, pneumonia, barolleosis, HIV, hepatitis, rubella dapat dideteksi.

Darah paling sering diambil dari vena, tetapi dalam beberapa kasus mungkin diperlukan bahan biologis yang berbeda:

1. Air liur.
2. Analisis urin
3. Mengikis dari bagian mana pun dari tubuh.
4. Sekresi seksual.
5. Cal.
6. Cairan tulang belakang.
7. Dahak dari bronkus saat ekspektasi.
8. Analisis lendir.

Tetapi metode PCR yang paling informatif masih berupa tes darah untuk TBC.

Koleksi biomaterial

Terlepas dari kenyataan bahwa prosedur untuk mengidentifikasi patogen dengan metode PCR hanya memakan waktu 4-4,5 jam, itu adalah salah satu jenis diagnosis yang paling sulit. Banyak faktor yang dapat memengaruhi keakuratan hasil. Misalnya, perlu untuk mengumpulkan sampel untuk penelitian sesuai dengan aturan tertentu. Yang utama adalah peningkatan sterilitas dalam pengumpulan bahan biologis. Karena itu, analisis ini sulit dilakukan anak kecil.

Jika sampel diambil sebagai darah dari vena, maka spesialis melakukan tes darah untuk PCR untuk TBC tidak hanya dengan jarum suntik steril, tetapi sesuai dengan semua aturan kebersihan umum.

Darah dikumpulkan dalam tabung reaksi khusus dan di seluruh penelitian disimpan dalam kondisi yang mencegah pembekuannya.

Jika ini adalah analisis urin PCR untuk TBC, maka cairan tersebut dikumpulkan pagi-pagi ketika orang tersebut baru bangun. Sebelum pergi ke toilet, pasien mandi dan kemudian mengambil wadah steril untuk mengambil urin.

Dalam hal mengambil kerokan dari alat kelamin, baik wanita dan pria, seluruh prosedur dilakukan di lembaga medis.

Ada beberapa tes yang lebih kompleks, seperti mengambil cairan dari sumsum tulang belakang. Dalam hal ini, semua tindakan dilakukan di rumah sakit oleh dokter berpengalaman.

Paling sering, bagian dari analisis reaksi rantai polimer diberikan dalam kasus-kasus seperti:

1. Untuk mendiagnosis penyakit di jaringan paru-paru.
2. Untuk mengidentifikasi sumber penyakit.
3. Untuk mengidentifikasi penyakit di luar paru-paru.
4. Untuk mendiagnosis kambuhnya penyakit.

Urutan tes

Diagnosis TBC pada anak-anak dan orang dewasa dengan bantuan reaksi berantai polimer melalui langkah-langkah berikut:

1. Dalam situasi tertentu, berbagai bahan diambil untuk penelitian. Ini bisa berupa pencucian darah, dahak, atau bronkial.
2. Setelah itu, bahan biologis yang diambil terpapar suhu tinggi (hingga + 97 ° C) untuk waktu tertentu (paling sering beberapa menit). Akibatnya, struktur asli DNA mikroorganisme, yang terdiri dari 2 rantai, hancur.
3. Setelah ini, suhu mulai berkurang, tindakan ini disebut anil. Pada saat ini, primer terhubung ke 1 dari sirkuit yang terputus.
4. Pada akhir perpanjangan dilakukan. Selama itu, sintesis biologis yang diperlukan dari molekul yang ada terjadi.

Diperlukan 25-30 siklus untuk mendapatkan jumlah salinan DNA yang diperlukan pada Mycobacterium tuberculosis.

Prosedur ini membutuhkan peralatan yang mahal, sehingga tidak semua institusi medis memiliki kesempatan untuk melakukan tes PCR untuk TBC alih-alih Mantoux.

Berkat vaksinasi dan studi PCR (bukan Mantoux) dimungkinkan untuk mencegah perkembangan penyakit berbahaya, seperti TBC. Sekarang Anda tidak perlu menunggu timbulnya penyakit atau mengambil gambar pada mesin sinar-X. Jika ada kecurigaan infeksi, untuk menghilangkan konsekuensi mengerikan dari penyakit, Anda selalu dapat melakukan tes PCR, yang menentukan kondisi tubuh dengan akurasi maksimal. Dalam kondisi real-time, bentuk diagnostik seperti tes Mantoux dan fluorografi secara bertahap menghilang ke latar belakang dibandingkan dengan metode PCR.

Metode untuk menguji dahak untuk TBC

Analisis dahak untuk TBC termasuk dalam serangkaian tindakan diagnostik yang diperlukan untuk mengidentifikasi dan mengklarifikasi diagnosis. Konten dahak akan membantu membuat rejimen pengobatan yang kompeten.

Cara lulus tes dahak untuk TBC

Dokter telah mengembangkan aturan untuk mengambil analisis. Air liur dikumpulkan di pagi hari, sebelum orang tersebut sarapan. Pertama, pasien melakukan prosedur kebersihan:

• pembersihan enamel gigi;
• pembilasan menyeluruh dengan air bersih rongga mulut dan faring.

Kemudian mulailah pengiriman materi secara langsung untuk analisis. Bagaimana cara lulus tes dahak? Persyaratan untuk prosedur:

1. Persiapan dimulai di muka, di malam hari. Pasien dianjurkan untuk minum obat khusus yang akan membuat sekresi paru lebih alami. Ini adalah senyawa ekspektoran dan penipisan. Jika prosedur seperti itu tidak membantu, lakukan inhalasi dengan komposisi farmasi untuk ekspektasi.
2. Siapkan wadah untuk dahak. Lendir harus dikumpulkan dalam piring yang disterilkan, ditutup rapat, rapat.
3. Sebelum melahirkan, batuk dan ludahkan dalam wadah. Volume air liur tidak boleh besar, membutuhkan dahak dari laring. Bakteri rongga mulut tidak termasuk dalam analisis.
4. Kumpulkan air liur di ruangan dengan ventilasi yang sangat baik. Analisis dilakukan dengan membuka jendela di atas pintu, menjalankan kap mesin. Disarankan untuk membuka jendela, atau pergi ke udara segar.

Selama prosedur di ruangan dilarang masuk. Orang luar dapat berkontribusi pada mikroflora kantor, dan dengan demikian ke dahak, formasi patologis. Petugas medis menerima analisis dalam masker khusus (respirator).

Analisis dahak untuk transkrip TB

Decoding dimulai dengan melihat penampilan lendir. Patologi mencirikan perubahan warna - menjadi gelap, dengan campuran darah yang terlihat. Warna bukan indikator utama. Dahak menjadi gelap karena minum anggur merah, gairah kopi. Beberapa obat dan minuman berwarna mengubah penampilan lendir.

Bahan yang dikumpulkan diuraikan oleh dua indikator, yaitu, dokter mendapatkan dua hasil:

Jawaban positif

Analisis dahak yang dihasilkan menegaskan adanya penyakit dalam tubuh. Yang menegaskan ini:

• benda asing atau inklusi yang tidak diketahui;
• adanya gumpalan lendir;
• garis-garis yang terlihat;
• bau bernanah yang tidak menyenangkan atau infeksi;
• nanah.

Metode penelitian makroskopis menyediakan data lain:

• konvolusi fibrinous;
• Formasi tongkat lensa Koch;
• produk dari dekomposisi dekomposisi zat bakteri;
• sisa-sisa proses patologis di jaringan paru-paru.

Hasil positif mengungkapkan peningkatan jumlah senyawa protein. Mencapai 100-120g / l.

Metode mikroskopis lain memungkinkan untuk mengidentifikasi elemen berbahaya lainnya:

• makrofag alveolar;
• komposisi leukosit yang terlalu tinggi;
• tingkat limfosit yang tinggi.

Untuk TBC, seseorang sering mencoba meludah dari mulutnya. Hemoptisis meningkatkan pembentukan sel darah merah. Volume air liur di mulut sedemikian rupa sehingga seseorang tidak bisa menelannya tanpa memperhatikan. Lebih dari dalam kondisi sehat.

Jawaban negatif

Studi ini menunjukkan bahwa jumlah leukosit kecil, sesuai dengan norma. Microbacteria juga tidak terdeteksi. Jika pasien merasa tidak sehat, maka spesialis akan meresepkan pemeriksaan tambahan. Ada kemungkinan bahwa penyakit ini berhubungan dengan penyakit paru-paru. Jenis dan metode diagnostik tambahan tergantung pada gejala dan kondisi pasien.

Bagaimana studi lendir

TBC adalah efek patologis berbahaya pada jaringan paru-paru, disintegrasi mereka diamati. Analisis dilakukan dengan beberapa metode. Yang paling umum - ELISA (immunoassay). Inti dari metode ini:

1. Antibodi ditambahkan ke larutan di mana bagian dahak ditempatkan.
2. Periksa konsentrasi antigen, dibandingkan dengan norma tubuh yang sehat.
3. Tentukan aktivitas lingkungan patologis.
4. Mendiagnosis

Versi kedua dari penelitian laboratorium adalah LIMBAH. Untuk metode mengambil peralatan medis khusus. Inti dari penelitian perangkat keras:

1. Dalam lingkungan mikro disuntikkan dahak untuk jenis infeksi yang dimaksud.
2. Aparat mulai tumbuh pada strain bakteri suhu tertentu.
3. Karbon dioksida diproduksi dalam proses, dan sensor mengambilnya.
4. Gas bergabung dengan pewarna.
5. Pada indeks fluoresensi membuat kesimpulan tentang jenis penyakit.

Cara termudah adalah budaya. Dahak ditaburkan di lingkungan khusus. Dokter memeriksa jenis koloni formasi mikroba. Metode ini adalah yang terpanjang, tetapi memungkinkan Anda untuk membuktikan diagnosis. Ini digunakan sangat jarang, justru karena jangka waktu yang panjang, yang tidak selalu sesuai untuk pasien.

Analisis pcr sputum untuk TBC

PCR adalah singkatan dari istilah rantai reaksi polimerase medis. Diagnostik adalah salah satu perkembangan terbaru para ilmuwan. Dibuka pada tahun 1983, pentingnya penemuan dihargai di dunia, ilmuwan menerima penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Metode ini didasarkan pada penggunaan rekayasa genetika. Fleksibilitas dalam kebutuhan untuk sejumlah kecil bahan untuk diagnosis yang akurat. Identifikasi infeksi tuberkulosis benar-benar di awal infeksi, tanpa menunggu perkembangan penyakit.

Inti dari metode itu adalah polimerase:

• seorang pasien mengambil serpihan partikel DNA;
• melakukan sintesis bahan secara biologis;
• ditentukan oleh kelas mikroorganisme.

Prosesnya rumit secara teknologi, itu melibatkan pemeriksaan genetika molekuler. PCR untuk TBC membutuhkan waktu beberapa jam. Waktu yang diperlukan untuk metode lain tidak dapat dibandingkan dengan dia dalam kecepatan. Setelah lulus analisis, pasien menunggu deteksi agen penyebab. Proses yang mendasari hanya spesialis yang bisa mengerti. Orang biasa tidak mengerti seluk-beluk metode ini.

Bagaimana diagnosis tes tuberkulosis:

1. Ambil bahan yang diperlukan untuk analisis. Apa itu: darah, perut, dahak, air, dicuci dengan bronkus.
2. Jenis bahan dipilih tergantung pada jenis infeksi yang mungkin patogen.
3. Langkah selanjutnya adalah mempelajari koneksi rantai. Dua rantai mengalami suhu tinggi hingga 98 derajat. Tahap ini disebut denaturasi (penghancuran rantai DNA struktural). Waktu paparan suhu - hingga 2 menit.
4. Tahap selanjutnya adalah anil. Suhu berkurang, primer diizinkan untuk terhubung ke untai DNA.
5. Akibatnya, terjadi perpanjangan - sintesis molekul yang diperlukan untuk proses tersebut.

Untuk analisis seperti itu, peralatan khusus diperlukan. Itu mahal, jadi tidak tersedia di fasilitas perawatan kesehatan apa pun. PCR dilakukan dalam kasus-kasus sulit, ketika tidak ada hasil pasti dari metode diagnostik konvensional, tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental untuk memeriksa kondisi pasien.

Keunggulan teknologi PCR:

1. Kecepatan mendapatkan hasilnya. Sekitar 5 jam seorang dokter memiliki data yang akurat. Kecepatan ini memungkinkan Anda untuk membantu pasien dalam keadaan darurat. Lebih sering, ini adalah periode pra operasi.
2. Diizinkan jika metode lain tidak dapat digunakan. Sebagai contoh, pengulangan sering sinar-X mengarah pada radiasi. PCR tidak berbahaya bagi pasien.
3. Anda dapat menjelajahi lingkungan biologis apa pun. Bahkan bentuk tuberkulosis yang kompleks pun diidentifikasi.
4. Metode ini aman, oleh karena itu, cocok untuk anak-anak.
5. Infeksi terdeteksi pada setiap tahap.
6. PCR tidak memungkinkan untuk menyembunyikan sejumlah kecil formasi mikro bakteri.
7. Cocok untuk memeriksa kemungkinan kekambuhan TBC.

Berapa banyak analisis dahak untuk TBC

Sampel diambil lebih dari satu kali. Pengulangan mengecualikan kemungkinan kesalahan atau mendapatkan bahan berkualitas buruk yang tidak mencerminkan posisi dan kondisi pasien yang sebenarnya. Berapa kali untuk mengumpulkan dahak, beri tahu dokter yang hadir. Pilihan terbaik adalah tiga kali sehari. Terkadang sampel tambahan mungkin diperlukan. Selama periode waktu yang mereka kumpulkan:

1. Sebelum makan pagi.
2. 3-4 jam setelah tes pertama.
3. Di hari kedua, juga sebelum makan.

Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang dapat memengaruhi tubuh siapa pun. Ada banyak situasi infeksi. Dengan kecurigaan kemungkinan infeksi, jangan menunggu untuk gejala yang cerah. Ini harus diuji, diperiksa dan pada waktunya untuk memulai perawatan.

Diagnosis PCR tuberkulosis

TBC adalah infeksi spesifik, fokusnya mungkin pada jaringan manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronis yang rejimen pengobatan optimalnya sulit dipilih. Salah satu alasan untuk ini adalah keterlambatan diagnosis, ketika mikobakteri, sementara di tubuh manusia, telah beradaptasi dengan banyak obat.

Apa metode diagnosis modern yang ada? Diagnosis PCR - apa itu? Bagaimana penelitian ini dilakukan? Dalam kasus apa TBC didiagnosis dengan metode ini dan apa esensinya?

Apa itu diagnosa PCR

Ini adalah salah satu metode paling modern untuk mendiagnosis tidak hanya penyakit, tetapi juga deteksi bahan biologis. Diagnosis PCR ditemukan relatif baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang ahli biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mengusulkan skema pemulihan yang kompleks untuk bahan biologis mikroorganisme dalam satu segmen pendek. Berkat penemuannya, ilmuwan dianugerahi penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Apa itu - PCR diagnosis infeksi? Polymerase chain reaction (PCR) adalah diagnosis deteksi penyakit virus, berdasarkan metode rekayasa genetika. Ini banyak digunakan dalam mikrobiologi medis, imunologi dan virologi. Metode ini bersifat universal dan membantu membuat diagnosis dengan sejumlah kecil bahan. Infeksi dapat dideteksi secara harfiah pada jam-jam pertama infeksi itu, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Metode ini terdiri dari memperoleh dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi fragmen genom (partikel DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya ke kelas mikroorganisme mana materi genetik yang diperoleh dimiliki dengan menggunakan metode genetik molekuler.

Terlepas dari kenyataan bahwa ini adalah proses yang kompleks, butuh waktu jauh lebih sedikit daripada banyak metode biologis untuk mendeteksi agen infeksi. Hanya dalam beberapa jam, mikroorganisme dapat dideteksi oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengisolasinya dari lingkungan (darah, cairan serebrospinal, sputum) dan menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi buatan. Sudah cukup bahwa fragmen kecil untai DNA dari agen infeksi hadir dalam bahan yang diteliti.

Dasar dari reaksi adalah kemungkinan di bawah kondisi buatan (in vitro) untuk membuat sintesis molekul asam nukleat dari agen infeksi.

Apa yang dibutuhkan untuk PCR?

1. Primer adalah segmen DNA dari mana biosintesis atau penciptaan dimulai.
2. Nukleotida atau senyawa kompleks yang menjadi dasar molekul DNA atau RNA.
3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin terjadi tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahapan diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekuler dilakukan oleh PCR? Prosedurnya sederhana dan membutuhkan waktu singkat, dengan mempertimbangkan pengumpulan materi.

1. Sebelum memulai penelitian, mereka mengambil bahan biologis yang diperlukan - ini adalah air cuci bronkial, darah, isi lambung, dahak. Jenis bahan biologis tergantung pada patogen yang dicurigai.
2. Denaturasi atau penghancuran struktur primer DNA, yang terdiri dari dua rantai. Inti dari tahap ini adalah untuk memisahkan dua sirkuit di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang berlangsung tidak lebih dari dua menit).
3. Pada tahap PCR berikutnya, yang disebut anil, suhu berkurang beberapa derajat sehingga primer akan mengikat untai DNA.
4. Perpanjangan, di mana sintesis molekul yang diinginkan berlangsung secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 siklus yang menerima jumlah salinan DNA mikroorganisme yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Apakah PCR memerlukan diagnosis TB?

Tidak mungkin bagi semua orang yang dicurigai tuberkulosis untuk melakukan PCR, karena metode ini membutuhkan peralatan yang mahal. Tidak semua klinik umum mampu membelinya. Selain itu, kebetulan bahwa metode biasa dalam mendiagnosis infeksi pada kebanyakan kasus juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

• survei pasien, anamnesis;
• pemeriksaan lengkap dari orang tersebut;
• sebuah studi menggunakan tes tuberkulin Mantoux;
• radiografi atau fluorografi;
• diagnostik komputer jika perlu;
• metode penelitian mikrobiologis: pemeriksaan mikroskopik dan pemeriksaan bakteriologis dahak.

PCR untuk TBC dilakukan dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental lainnya.

Meskipun ada banyak metode diagnostik, kejadian TB terus bertambah. Saat ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga fitur lainnya:

• penyakit ini sering terjadi dalam bentuk yang parah;
• jumlah kasus fatal meningkat;
• semakin resisten terhadap kemoterapi modern didiagnosis bentuk penyakit.

Keengganan orang itu sendiri untuk menjalani pemeriksaan medis rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi mengarah pada penyebaran tuberkulosis. Dalam kondisi seperti itu, kita memerlukan metode penelitian yang cepat, informatif dan efektif yang harus dapat diakses oleh anak-anak dan orang dewasa. Semua metode diagnostik di atas jauh lebih rendah daripada PCR.

Manfaat mendiagnosis TB dengan PCR

Penelitian ini, meskipun baru, telah membuktikan dirinya dengan baik, terutama dalam kasus kontroversial di mana tidak mungkin untuk membuat diagnosis karena sejumlah alasan.

Berkat PCR, jauh lebih mudah untuk mendeteksi agen penyebab TBC dalam bahan uji.

Keuntungan dari diagnosa PCR adalah sebagai berikut.

1. Ini adalah analisis cepat. Sebuah fragmen kecil dari molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi darurat ketika, misalnya, sebelum operasi perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit dengan TBC.
2. Analisis PCR diperbolehkan jika metode lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mendeteksi TB paru, kadang-kadang Anda harus mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi radiasi dosis besar).
3. Dengan bantuan PCR, setiap lingkungan biologis diperiksa untuk mengetahui adanya patogen di dalamnya. Misalnya, Anda dapat melakukan penelitian cairan serebrospinal, jika ada kecurigaan meningitis tuberkulosis.
4. Diizinkan diagnosis PCR penyakit menular pada anak-anak, karena metode ini aman.
5. Memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen pada setiap tahap penyakit.
6. Sensitivitas PCR yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, bahkan jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam bahan biologis.
7. Adalah baik untuk melakukan diagnosis kekambuhan penyakit.

Setelah semua membaca PCR tampaknya metode diagnostik yang hampir sempurna, yang harus membuat semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka harus diperhitungkan.

Kekurangan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Saat ini, diagnostik semacam itu lebih jarang terjadi daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasannya.

1. Ini adalah metode penelitian yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak ada karena biayanya yang tinggi, tetapi analisis masih dapat dilakukan di laboratorium berbayar.
2. Segera setelah perawatan, mikobakteri mati atau hidup dalam jumlah kecil mungkin masih ada dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif selama diagnosa PCR), sehingga metode ini tidak dapat diandalkan saat ini, tidak masuk akal untuk melakukannya.
3. Mutasi mikobakteri menyebabkan PCR tidak efektif - urutan untai DNA normal tidak dapat disintesis.
4. Penting untuk memilih lingkungan yang tepat untuk penelitian, darah diambil hanya jika diduga terinfeksi (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada masalah tuberkulosis organ sistem saraf. Dalam hal ini, PCR tidak akan dapat mendeteksi patogen dan diagnosis tidak akan informatif.

Indikasi untuk mendeteksi TB menggunakan analisis PCR

Diagnosis PCR tuberkulosis dilakukan paling sering pada kasus kontroversial. Kapan dokter merujuk penelitian ini?

1. Jika sulit untuk membuat diagnosis menggunakan metode yang tersedia biasa, tetapi ada kontak dengan pasien dengan TBC.
2. Dalam kasus ketika seseorang tidak dapat dikirim ke klinik untuk menjalani tes rutin rutin untuk TB, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan PCR, karena dahak untuk tes dapat dikirim dalam toples dan diagnosa dikonfirmasi dalam beberapa jam.
3. Jika seseorang akan menjalani operasi darurat dan sangat mendesak untuk mengetahui apakah dia sakit TBC.
4. Jika perlu, seorang wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa TBC menggunakan PCR, karena metode ini aman.
5. Pada basis berbayar, siapa pun yang belum didiagnosis dengan TB telah dikonfirmasi menggunakan metode bakteriologis dan fluoroskopi. Hal ini terjadi ketika lesi di paru-paru tidak terlihat dalam gambar langsung, dan orang selama pengiriman dahak untuk penelitian tidak dapat mengikuti rekomendasi untuk pengumpulan bahan yang benar. Dalam hal ini, orang tersebut khawatir tentang semua gejala karakteristik TB paru.
6. Ketika ada keraguan tentang hasil tes Mantoux.
7. Lebih disukai untuk melakukan diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak. Prosedur ini aman, tidak menciptakan paparan radiasi tambahan, dan efektif dalam mendeteksi bentuk penyakit yang sulit didiagnosis.

Diagnosis tuberkulosis yang tepat waktu adalah kunci untuk perawatan yang diresepkan dengan benar dan mengurangi penyebaran penyakit. Seringkali, metode deteksi penyakit yang sudah dikenal tidak selalu efektif. Oleh karena itu, PCR saat ini adalah salah satu cara yang paling dapat diandalkan dan aman untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal perkembangannya.

Analisis PCR

PCR (reaksi berantai polimerase) sejauh ini merupakan metode tercepat dan paling dapat diandalkan untuk mendiagnosis penyakit menular.

Prinsip metode reaksi rantai polimerase dikembangkan oleh Kary Mullis pada tahun 1983. Untuk penemuannya, K. Mullis pada tahun 1993 menerima Hadiah Nobel dalam Kimia.

Metode PCR memungkinkan untuk mencapai peningkatan yang signifikan dalam konsentrasi kecil fragmen asam nukleat tertentu (DNA) dalam bahan biologis (sampel). Metode ini didasarkan pada penggandaan selektif ganda (amplifikasi) pada bagian DNA tertentu menggunakan enzim dalam kondisi buatan.

Kelebihan metode diagnostik PCR sebagai metode diagnostik untuk penyakit menular

Deteksi patogen secara langsung

Banyak metode diagnostik tradisional, seperti enzim immunoassay, mendeteksi penanda protein yang merupakan produk dari aktivitas vital agen infeksi, yang hanya memberikan bukti tidak langsung adanya infeksi. Identifikasi wilayah DNA spesifik patogen oleh PCR memberikan indikasi langsung adanya patogen.

Spesifisitas tinggi

Spesifisitas tinggi dari metode PCR adalah karena fakta bahwa fragmen DNA yang unik terdeteksi pada bahan yang diteliti. Spesifisitas ditentukan oleh urutan nukleotida primer, yang mengecualikan kemungkinan memperoleh hasil yang salah, berbeda dengan metode analisis imunologis, di mana kesalahan dalam kaitannya dengan antigen reaksi silang sering terjadi.

Sensitivitas tinggi

Metode PCR memungkinkan untuk mendeteksi sel tunggal bakteri atau virus. Analisis PCR mengungkapkan adanya patogen penyakit menular dalam kasus di mana metode lain (imunologis, bakteriologis, mikroskopis) tidak dapat melakukan ini. Sensitivitas analisis PCR adalah 10-100 sel per sampel (sensitivitas uji imunologis dan mikroskopis adalah 103-105 sel).

Universalitas prosedur untuk mendeteksi berbagai patogen

Bahan untuk studi oleh PCR adalah DNA patogen. Metode ini didasarkan pada deteksi fragmen DNA atau RNA yang spesifik untuk organisme tertentu. Kesamaan komposisi kimia dari semua asam nukleat memungkinkan penggunaan metode penelitian laboratorium terpadu. Ini memungkinkan untuk mendiagnosis beberapa patogen dari bioassay tunggal.

Tingkat hasil analisis yang tinggi

Untuk analisis PCR, isolasi dan penanaman kultur patogen tidak diperlukan, yang membutuhkan banyak waktu. Metode terpadu pemrosesan biomaterial dan deteksi produk reaksi dan otomatisasi proses amplifikasi memungkinkan untuk melakukan analisis lengkap dalam 4-5 jam.

Kemampuan untuk mendiagnosis tidak hanya infeksi akut tetapi juga laten

Metode PCR sangat efektif untuk mendiagnosis mikroorganisme yang sulit diolah, tidak dibiakkan, dan persisten yang sering dijumpai pada infeksi laten dan kronis, karena metode ini menghindari kesulitan yang terkait dengan pertumbuhan mikroorganisme semacam itu di laboratorium. Penggunaan diagnostik PCR juga sangat efektif terhadap patogen dengan variabilitas antigenik yang tinggi dan parasit intraseluler.

Seberapa efektif pengujian dahak untuk TBC oleh PCR?

Untuk mengidentifikasi tongkat Koch pada manusia, berbagai metode diagnostik digunakan. Berkat dia, patologi dapat dideteksi bahkan pada tahap awal, yang meningkatkan peluang pasien untuk pulih. Analisis dahak untuk TBC adalah teknik yang paling dihargai dan cukup efektif. Apa itu dan berapa biaya analisis seperti itu?

Apa analisis dahak oleh PCR?

PCR adalah singkatan dari reaksi berantai polimerase. Metode ini efektif melawan penyakit menular. Untuk menegakkan diagnosis yang jelas, Anda tidak perlu mengumpulkan biomaterial dalam jumlah besar dan menunggu lama, seperti dalam kasus penaburan dahak.

Metode ini didasarkan pada memperoleh DNA dari partikel mikroorganisme. Selanjutnya, penelitian genetik molekuler akan menentukan jenis mikroorganisme apa yang harus mencakup bahan yang tersedia. Dalam kondisi tabung reaksi, seorang spesialis akan mensintesis molekul bakteri dan membuat kesimpulan yang tepat dalam beberapa jam.

Keefektifan

Analisis dahak untuk Mycobacterium tuberculosis efektif ketika tongkat Koch mengenai sistem pernapasan. Dalam hal ini, penyakit ini dapat dengan mudah diidentifikasi, bahkan pada jam-jam pertama infeksi.

Tetapi, analisis dahak tidak akan menunjukkan hasil yang andal jika TBC hadir:

• tulang;
• otak, sumsum tulang belakang;
• sistem saraf;
• sendi, dll.

Ahli phytisiatrician akan dapat menentukan jenis penyakit, dengan mempertimbangkan gejala saat ini dan mengandalkan hasil analisis umum dan lainnya.

Ini juga tidak sesuai untuk metode penelitian dalam kasus ketika Anda perlu melakukan analisis kontrol setelah pengobatan terapi penyakit. Hasilnya akan positif, seperti dalam tubuh, dalam hal apapun, masih ada IBC hidup atau mati. Lebih baik memberi preferensi pada prosedur diagnostik lain.

Kontraindikasi untuk metode ini

Dengan demikian, tidak ada kontraindikasi untuk pengujian sputum untuk tuberkulosis menggunakan PCR. Ada batasannya. Seperti disebutkan di atas, tidak perlu untuk melakukan itu setelah perawatan TBC. Hasilnya tidak akan berguna. Di sini diinginkan untuk menggunakan diagnosis yang berbeda.

Selain itu, tidak ada kendala lain untuk diagnosis ini. Dahak dapat diperiksa dalam kategori usia apa pun dan untuk penyakit terkait. Bahkan jika tidak ada pelepasan dahak yang banyak, analisis dapat dilakukan dengan mengambil lendir menggunakan bronkoskopi.

Manfaat

Dalam metode ini, massa plus, ini termasuk:

1. Spesifisitas dan sensitivitas tinggi. Hanya agen penyebab TBC yang terdeteksi. Tidak ada jawaban yang salah jika semua nuansa prosedur diperhitungkan. Mycobacteria terdeteksi bahkan ketika jumlahnya minimum. Bahkan jika ada 10 sel abnormal dalam bahan yang dikumpulkan, infeksi akan terdeteksi.
2. Kecepatan mendapatkan jawaban. Berapa banyak analisis yang dilakukan? Setelah 3-5 jam, Anda bisa mendapatkan hasilnya. Tidak perlu melakukan kultur sputum untuk TBC, dan ini mengurangi waktu.
3. Anda dapat mengidentifikasi sebagai infeksi tersembunyi, dan infeksi akut.
4. Tidak ada kontraindikasi absolut. Hal ini memungkinkan untuk melaksanakan prosedur untuk semua orang tanpa kecuali (bahkan untuk anak kecil), dan terutama ketika metode lain tidak terselesaikan.
5. Dengan bantuan diagnostik PCR, berbagai biomaterial (urin, feses, darah, air liur, cairan serebrospinal, dll.) Dipelajari.
6. Metode ini mengungkapkan TBC pada tahap awal, pada jam-jam pertama setelah infeksi.

ke konten ↑

Kekurangan

Selain sisi positif, ada juga sisi negatifnya. Ini adalah:

1. Analisis PCR adalah "kesenangan" yang mahal. Selain itu, peralatan yang diperlukan untuk implementasinya tidak tersedia di setiap pusat medis. Di klinik jarang ditemukan, karena nilainya juga bagus. Jika kita berbicara tentang klinik swasta, maka ya, Anda dapat menemukan diagnosis semacam ini. Biarkan dirinya, sayangnya, tidak bisa semua orang.
2. Ini menunjukkan hasil positif palsu pada orang-orang yang baru saja menjalani pengobatan TB.
3. Jika MBC dimutasi, metode ini juga dapat memberikan hasil yang salah.
4. Jika materi dikumpulkan secara tidak benar, atau spesialis yang melakukan penelitian memiliki tingkat kualifikasi yang tidak memadai, maka kerusakan juga dimungkinkan. Dalam beberapa kasus, prosedur harus diulang beberapa kali dan setiap kali pembayaran diulang.

ke konten ↑

Persiapan untuk analisis

Agar bahan menjadi berkualitas tinggi, ia harus dipasang dengan benar dan dipersiapkan dengan benar.

Ada aturan tertentu untuk mengumpulkan dahak untuk TBC. Algoritme tindakan adalah sebagai berikut:

1. Bahkan pada malam hari, di malam hari seseorang perlu minum ekspektoran (jika dahak bergerak buruk). Bahkan jika itu tidak membantu, inhalasi harus dilakukan berdasarkan obat pengencer dan ekspektoran. Dengan tidak adanya dahak, pasien ditargetkan untuk bronkoskopi. Selama prosedur inilah bahan untuk penelitian diambil.
2. Beli wadah khusus terlebih dahulu. Itu steril dan kedap udara, jadi tidak ada tambahan yang bisa ditempatkan di sana, serta dibuka terlebih dahulu.
3. Ruangan tempat pengumpulan dahak harus berventilasi baik. Hal ini diperlukan untuk membuka jendela, pintu, nyalakan kap mesin. Pilihan lain yang baik adalah untuk mendapatkan udara segar (misalnya, ke balkon atau ke halaman).
4. Segera sebelum prosedur, Anda harus memperingatkan semua orang sehingga tidak ada yang memasuki ruangan di mana semuanya akan terjadi. Seharusnya tidak ada mikropartikel tambahan dalam biomaterial - ini penting.
5. Makan sebelum memetik tidak dianjurkan.
6. Bilas mulut dan tenggorokan.
7. Air liur dimuntahkan. Kapasitasnya harus jatuh minimum.
8. Dengan batuk, seseorang mengeluarkan dahak dan meludahkannya ke dalam wadah yang sudah disiapkan. Setelah prosedur, tutup dengan rapat dan bawa sampel ke laboratorium.

Bagaimana cara mengumpulkan dahak harus memberi tahu dokter. Jika pasien tidak berani melakukannya sendiri, maka petugas kesehatan datang untuk menyelamatkan. Selama manipulasi, mereka mengenakan topeng pelindung khusus. Mengumpulkan dahak akan berada di ruangan khusus, di mana tidak ada jalan bagi orang asing. Jika pasien tidak dapat datang ke klinik, spesialis datang ke rumahnya dan membantu mengumpulkan lendir.

Jika bronkoskopi dilakukan, maka pasien disuntikkan ke dalam trakea dengan alat - bronkoskop. Dengan bantuannya bahan diambil.

Untuk keandalan, disarankan untuk lulus analisis tiga kali, yaitu:

• di pagi hari dengan perut kosong;
• setelah pertama kali setelah 4-5 jam;
• 24 jam setelah studi pertama dan juga sebelum makan.

ke konten ↑

Bagaimana analisis ini dilakukan?

Melewati tes dahak untuk TBC hanya sebagian dari pekerjaan. Utama di depan. Banyak tergantung pada seberapa siap spesialis.

Kursus studi adalah sebagai berikut:

1. Spesialis melanjutkan ke penghancuran struktur primer DNA (denaturasi). Ada dua rantai di sini. Pada suhu tinggi, mereka terpisah.
2. Pada tahap selanjutnya, suhu berkurang (anil). Ini diperlukan untuk koneksi untai DNA dengan primer.
3. Tahap ketiga adalah pemanjangan. Di sini molekul yang diperlukan disintesis.

ke konten ↑

Hasil decoding

Mycobacterium tuberculosis dalam dahak oleh PCR dapat dideteksi atau tidak. Hasil positif didasarkan pada kenyataan bahwa ada DNA stick Koch di dalam biomaterial. Ini menunjukkan bahwa orang tersebut terinfeksi. Dengan negatif - 98% dari fakta bahwa subjek tidak terinfeksi.

Indikator dapat dinilai berdasarkan:

• fase patologi apa (laten atau aktif);
• seberapa banyak tubuh terpengaruh;
• apakah pengobatan yang dipilih efektif dalam kasus tertentu.

Ingatlah bahwa tidak ada yang menyeluruh. Oleh karena itu, mungkin ada hasil positif palsu atau negatif palsu. Untuk memastikan kebenarannya, prosedur diagnostik lain disarankan atau PCR dilakukan dua kali (tiga kali).

Analisis biaya di berbagai pusat

Anda dapat memberikan dahak untuk PCR di berbagai klinik. Mari kita berikan contoh beberapa pusat Moskow populer dengan kebijakan penetapan harga.

Analisis dahak PCR untuk TBC

Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis), DNA (PCR), dahak berkualitas tinggi

Persiapan studi khusus tidak diperlukan.

Bahan uji: Dahak

Tuberkulosis (dari tuberculum Latin - "tubercle") adalah penyakit menular spesifik pada manusia dan hewan, yang ditularkan terutama oleh tetesan di udara. Risiko infeksi meningkat karena penurunan kekebalan yang disebabkan oleh HIV / AIDS, penyakit ginjal kronis, diabetes, kehamilan, penuaan, transplantasi organ, dan obat penekan kekebalan yang terkait. Selain itu, anak-anak di bawah 5 tahun setelah giliran tes TB dan mereka yang memiliki kontak dengan pasien dengan TB lebih rentan terhadap penyakit. Kelompok yang paling rentan termasuk para tunawisma, tahanan, pecandu narkoba, dan orang tua.

TBC manusia dan hewan menyebabkan beberapa spesies mikobakteri yang berkaitan erat. Agen penyebab tuberkulosis yang paling umum pada manusia adalah spesies Mycobacterium tuberculosis.

Setelah mengidentifikasi agen penyebab TB, perlu dilakukan survei tentang sensitivitas mikobakteri yang terdeteksi terhadap obat anti-TB. Prosedur ini sangat penting untuk penunjukan pengobatan penyakit yang memadai.

Analisis ini memungkinkan untuk menentukan keberadaan bahan genetik (DNA) dari mycobacterium tuberculosis dalam dahak. Analisis ini membantu dalam diagnosis TB paru.

Metode PCR adalah reaksi berantai polimerase, yang memungkinkan mengidentifikasi keberadaan bahan genetik dalam bahan biologis.
Informasi lebih lanjut tentang metode PCR - varietasnya, kelebihan dan aplikasinya dalam diagnosa medis.

Nilai Referensi - Norma
(Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis), DNA (PCR), kualitatif, dahak)

Informasi mengenai nilai referensi indikator, serta komposisi indikator yang termasuk dalam analisis mungkin sedikit berbeda tergantung pada laboratorium!

Biasanya, DNA mycobacterium tuberculosis tidak ada dalam dahak.

No. 341MK, Mycobacterium tuberculosis, penentuan DNA (Mycobacterium tuberculosis, DNA) dalam dahak, mencuci, cairan lavage

Penentuan DNA patogen tuberkulosis: kompleks Mycobacterium: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum dalam dahak, pencucian dari bronkus, cairan lavage dengan deteksi PCR dengan mode nyata. waktu.

Tuberculosis (dari bahasa Latin. Tuberculum - tubercle) - penyakit manusia yang umum dan tergantung sosial. Mereka sakit dan binatang. Agen penyebab TBC ditemukan oleh R. Koch pada tahun 1882. Ini adalah bakteri aerob yang tahan asam (74 spesies) dari genus mikobakterium, didistribusikan secara luas di tanah, air, dan pada hewan. Pada manusia, patogen yang paling umum adalah Mycobacterium tuberculosis. Yang paling sering kedua adalah Mycobacterium bovis. Kedua spesies sangat tahan terhadap banyak faktor lingkungan, dan tetap hidup dalam tubuh untuk waktu yang sangat lama dan dapat menyebabkan penyakit bertahun-tahun setelah infeksi. Sangat penting bahwa mycobacterium tuberculosis dapat membentuk apa yang disebut bentuk-L. Bertahan dalam tubuh, mereka menciptakan kekebalan tuberkulosis. Untuk waktu yang lama, tuberkulosis dapat terjadi secara laten dan dapat dideteksi secara kebetulan, meskipun gejala seperti kelemahan, kelelahan, demam ringan, keringat malam, dan anemia dan leukopenia sering dimanifestasikan.

Saat ini, terlepas dari semua pencapaian terapi antimikroba, TBC mengancam masa depan bangsa. Karena itu, semua metode diagnostik, terutama bentuk latennya sangat penting.

Ada banyak metode diagnosis laboratorium TB: smear microscopy (paling sering digunakan untuk dahak tujuan ini), metode kultur klasik, ELISA. Semua dari mereka memiliki kelebihan, tetapi juga kerugian tertentu, khususnya, deteksi mikobakteri hanya dalam kasus jumlah yang cukup.

Dalam beberapa tahun terakhir, reaksi berantai polimerase (PCR) telah digunakan untuk diagnosis. Sensitivitasnya yang tinggi memungkinkan mendeteksi sel tunggal dan bahkan fragmen DNA dalam bahan yang diteliti. Metode ini menghilangkan reaksi silang dan spesifisitas mencapai 100%. PCR memungkinkan diferensiasi bentuk TB yang terbatas dan disebarluaskan, terutama pada anak-anak, bahkan dengan hasil negatif studi mikrobiologis.

Indikator analitik:

• fragmen yang terdeteksi - bagian spesifik dari DNA mikobakteri;
• spesifisitas penentuan - 100%;
• sensitivitas deteksi - 100 salinan DNA mikobakteri dalam sampel.

• Bronkitis, bronkopneumonia disertai dengan peningkatan tajam pada kelenjar getah bening basal.
• Hemoptisis pada latar belakang kondisi asthenik yang umum.
• Peradangan akut pada saluran pernapasan bagian atas dan bawah, disertai dengan batuk produktif di hadapan kontak yang lama dengan pasien dengan TB dalam sejarah.

Interpretasi hasil penelitian berisi informasi untuk dokter yang hadir dan bukan diagnosis. Informasi dalam bagian ini tidak dapat digunakan untuk diagnosa dan pengobatan sendiri. Diagnosis yang akurat dibuat oleh dokter, menggunakan hasil pemeriksaan ini dan informasi yang diperlukan dari sumber lain: anamnesis, hasil pemeriksaan lain, dll.

Kualitas tes. Hasilnya diberikan dalam istilah "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi."

"Terdeteksi": Fragmen DNA spesifik Mycobacterium spesifik untuk mikobakteri ditemukan dalam sampel yang akan dianalisis.

“Tidak terdeteksi”: dalam sampel yang dianalisis, fragmen DNA spesifik-mikobakterium atau konsentrasi patogen dalam sampel tidak ditemukan di bawah batas sensitivitas uji.

Perhatikan, bahwa waktu studi PCR dapat ditingkatkan ketika melakukan tes konfirmasi.

1. Makarevich A.E. Penyakit Pernafasan - M. Higher School, 2000. - 368 hal.
2. Jacobs D. et al. Buku pegangan uji laboratorium / Lexi-Comp./2002 - hlm. 828 - 829.

• Informasi umum

* Periode yang ditentukan tidak termasuk hari pengambilan biomaterial

Sputum, apusan, cairan lavage

Deteksi PCR waktu-nyata.

Di bagian ini, Anda bisa mengetahui berapa biayanya untuk menyelesaikan studi ini di kota Anda, lihat deskripsi tes dan tabel interpretasi hasil. Memilih tempat untuk lulus analisis "Mycobacterium tuberculosis, penentuan DNA (Mycobacterium tuberculosis, DNA) dalam dahak, mencuci, cairan lavage" di Moskow dan kota-kota lain di Rusia Kantor medis regional dapat bervariasi.

Metode untuk menguji dahak untuk TBC

Analisis dahak untuk TBC termasuk dalam serangkaian tindakan diagnostik yang diperlukan untuk mengidentifikasi dan mengklarifikasi diagnosis. Konten dahak akan membantu membuat rejimen pengobatan yang kompeten.

Cara lulus tes dahak untuk TBC

Dokter telah mengembangkan aturan untuk mengambil analisis. Air liur dikumpulkan di pagi hari, sebelum orang tersebut sarapan. Pertama, pasien melakukan prosedur kebersihan:

• pembersihan enamel gigi;
• pembilasan menyeluruh dengan air bersih rongga mulut dan faring.

Kemudian mulailah pengiriman materi secara langsung untuk analisis. Bagaimana cara lulus tes dahak? Persyaratan untuk prosedur:

1. Persiapan dimulai di muka, di malam hari. Pasien dianjurkan untuk minum obat khusus yang akan membuat sekresi paru lebih alami. Ini adalah senyawa ekspektoran dan penipisan. Jika prosedur seperti itu tidak membantu, lakukan inhalasi dengan komposisi farmasi untuk ekspektasi.
2. Siapkan wadah untuk dahak. Lendir harus dikumpulkan dalam piring yang disterilkan, ditutup rapat, rapat.
3. Sebelum melahirkan, batuk dan ludahkan dalam wadah. Volume air liur tidak boleh besar, membutuhkan dahak dari laring. Bakteri rongga mulut tidak termasuk dalam analisis.
4. Kumpulkan air liur di ruangan dengan ventilasi yang sangat baik. Analisis dilakukan dengan membuka jendela di atas pintu, menjalankan kap mesin. Disarankan untuk membuka jendela, atau pergi ke udara segar.

Selama prosedur di ruangan dilarang masuk. Orang luar dapat berkontribusi pada mikroflora kantor, dan dengan demikian ke dahak, formasi patologis. Petugas medis menerima analisis dalam masker khusus (respirator).

Analisis dahak untuk transkrip TB

Decoding dimulai dengan melihat penampilan lendir. Patologi mencirikan perubahan warna - menjadi gelap, dengan campuran darah yang terlihat. Warna bukan indikator utama. Dahak menjadi gelap karena minum anggur merah, gairah kopi. Beberapa obat dan minuman berwarna mengubah penampilan lendir.

Bahan yang dikumpulkan diuraikan oleh dua indikator, yaitu, dokter mendapatkan dua hasil:

Jawaban positif

Analisis dahak yang dihasilkan menegaskan adanya penyakit dalam tubuh. Yang menegaskan ini:

• benda asing atau inklusi yang tidak diketahui;
• adanya gumpalan lendir;
• garis-garis yang terlihat;
• bau bernanah yang tidak menyenangkan atau infeksi;
• nanah.

Metode penelitian makroskopis menyediakan data lain:

• konvolusi fibrinous;
• Formasi tongkat lensa Koch;
• produk dari dekomposisi dekomposisi zat bakteri;
• sisa-sisa proses patologis di jaringan paru-paru.

Hasil positif mengungkapkan peningkatan jumlah senyawa protein. Mencapai 100-120g / l.

Metode mikroskopis lain memungkinkan untuk mengidentifikasi elemen berbahaya lainnya:

• makrofag alveolar;
• komposisi leukosit yang terlalu tinggi;
• tingkat limfosit yang tinggi.

Untuk TBC, seseorang sering mencoba meludah dari mulutnya. Hemoptisis meningkatkan pembentukan sel darah merah. Volume air liur di mulut sedemikian rupa sehingga seseorang tidak bisa menelannya tanpa memperhatikan. Lebih dari dalam kondisi sehat.

Jawaban negatif

Studi ini menunjukkan bahwa jumlah leukosit kecil, sesuai dengan norma. Microbacteria juga tidak terdeteksi. Jika pasien merasa tidak sehat, maka spesialis akan meresepkan pemeriksaan tambahan. Ada kemungkinan bahwa penyakit ini berhubungan dengan penyakit paru-paru. Jenis dan metode diagnostik tambahan tergantung pada gejala dan kondisi pasien.

Bagaimana studi lendir

TBC adalah efek patologis berbahaya pada jaringan paru-paru, disintegrasi mereka diamati. Analisis dilakukan dengan beberapa metode. Yang paling umum - ELISA (immunoassay). Inti dari metode ini:

1. Antibodi ditambahkan ke larutan di mana bagian dahak ditempatkan.
2. Periksa konsentrasi antigen, dibandingkan dengan norma tubuh yang sehat.
3. Tentukan aktivitas lingkungan patologis.
4. Mendiagnosis

Versi kedua dari penelitian laboratorium adalah LIMBAH. Untuk metode mengambil peralatan medis khusus. Inti dari penelitian perangkat keras:

1. Dalam lingkungan mikro disuntikkan dahak untuk jenis infeksi yang dimaksud.
2. Aparat mulai tumbuh pada strain bakteri suhu tertentu.
3. Karbon dioksida diproduksi dalam proses, dan sensor mengambilnya.
4. Gas bergabung dengan pewarna.
5. Pada indeks fluoresensi membuat kesimpulan tentang jenis penyakit.

Cara termudah adalah budaya. Dahak ditaburkan di lingkungan khusus. Dokter memeriksa jenis koloni formasi mikroba. Metode ini adalah yang terpanjang, tetapi memungkinkan Anda untuk membuktikan diagnosis. Ini digunakan sangat jarang, justru karena jangka waktu yang panjang, yang tidak selalu sesuai untuk pasien.

Analisis pcr sputum untuk TBC

PCR adalah singkatan dari istilah rantai reaksi polimerase medis. Diagnostik adalah salah satu perkembangan terbaru para ilmuwan. Dibuka pada tahun 1983, pentingnya penemuan dihargai di dunia, ilmuwan menerima penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Metode ini didasarkan pada penggunaan rekayasa genetika. Fleksibilitas dalam kebutuhan untuk sejumlah kecil bahan untuk diagnosis yang akurat. Identifikasi infeksi tuberkulosis benar-benar di awal infeksi, tanpa menunggu perkembangan penyakit.

Inti dari metode itu adalah polimerase:

• seorang pasien mengambil serpihan partikel DNA;
• melakukan sintesis bahan secara biologis;
• ditentukan oleh kelas mikroorganisme.

Prosesnya rumit secara teknologi, itu melibatkan pemeriksaan genetika molekuler. PCR untuk TBC membutuhkan waktu beberapa jam. Waktu yang diperlukan untuk metode lain tidak dapat dibandingkan dengan dia dalam kecepatan. Setelah lulus analisis, pasien menunggu deteksi agen penyebab. Proses yang mendasari hanya spesialis yang bisa mengerti. Orang biasa tidak mengerti seluk-beluk metode ini.

Bagaimana diagnosis tes tuberkulosis:

1. Ambil bahan yang diperlukan untuk analisis. Apa itu: darah, perut, dahak, air, dicuci dengan bronkus.
2. Jenis bahan dipilih tergantung pada jenis infeksi yang mungkin patogen.
3. Langkah selanjutnya adalah mempelajari koneksi rantai. Dua rantai mengalami suhu tinggi hingga 98 derajat. Tahap ini disebut denaturasi (penghancuran rantai DNA struktural). Waktu paparan suhu - hingga 2 menit.
4. Tahap selanjutnya adalah anil. Suhu berkurang, primer diizinkan untuk terhubung ke untai DNA.
5. Akibatnya, terjadi perpanjangan - sintesis molekul yang diperlukan untuk proses tersebut.

Untuk analisis seperti itu, peralatan khusus diperlukan. Itu mahal, jadi tidak tersedia di fasilitas perawatan kesehatan apa pun. PCR dilakukan dalam kasus-kasus sulit, ketika tidak ada hasil pasti dari metode diagnostik konvensional, tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental untuk memeriksa kondisi pasien.

Keunggulan teknologi PCR:

1. Kecepatan mendapatkan hasilnya. Sekitar 5 jam seorang dokter memiliki data yang akurat. Kecepatan ini memungkinkan Anda untuk membantu pasien dalam keadaan darurat. Lebih sering, ini adalah periode pra operasi.
2. Diizinkan jika metode lain tidak dapat digunakan. Sebagai contoh, pengulangan sering sinar-X mengarah pada radiasi. PCR tidak berbahaya bagi pasien.
3. Anda dapat menjelajahi lingkungan biologis apa pun. Bahkan bentuk tuberkulosis yang kompleks pun diidentifikasi.
4. Metode ini aman, oleh karena itu, cocok untuk anak-anak.
5. Infeksi terdeteksi pada setiap tahap.
6. PCR tidak memungkinkan untuk menyembunyikan sejumlah kecil formasi mikro bakteri.
7. Cocok untuk memeriksa kemungkinan kekambuhan TBC.

Berapa banyak analisis dahak untuk TBC

Sampel diambil lebih dari satu kali. Pengulangan mengecualikan kemungkinan kesalahan atau mendapatkan bahan berkualitas buruk yang tidak mencerminkan posisi dan kondisi pasien yang sebenarnya. Berapa kali untuk mengumpulkan dahak, beri tahu dokter yang hadir. Pilihan terbaik adalah tiga kali sehari. Terkadang sampel tambahan mungkin diperlukan. Selama periode waktu yang mereka kumpulkan:

1. Sebelum makan pagi.
2. 3-4 jam setelah tes pertama.
3. Di hari kedua, juga sebelum makan.

Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang dapat memengaruhi tubuh siapa pun. Ada banyak situasi infeksi. Dengan kecurigaan kemungkinan infeksi, jangan menunggu untuk gejala yang cerah. Ini harus diuji, diperiksa dan pada waktunya untuk memulai perawatan.

Diagnosis PCR tuberkulosis

TBC adalah infeksi spesifik, fokusnya mungkin pada jaringan manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronis yang rejimen pengobatan optimalnya sulit dipilih. Salah satu alasan untuk ini adalah keterlambatan diagnosis, ketika mikobakteri, sementara di tubuh manusia, telah beradaptasi dengan banyak obat.

Apa metode diagnosis modern yang ada? Diagnosis PCR - apa itu? Bagaimana penelitian ini dilakukan? Dalam kasus apa TBC didiagnosis dengan metode ini dan apa esensinya?

Apa itu diagnosa PCR

Ini adalah salah satu metode paling modern untuk mendiagnosis tidak hanya penyakit, tetapi juga deteksi bahan biologis. Diagnosis PCR ditemukan relatif baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang ahli biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mengusulkan skema pemulihan yang kompleks untuk bahan biologis mikroorganisme dalam satu segmen pendek. Berkat penemuannya, ilmuwan dianugerahi penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Apa itu - PCR diagnosis infeksi? Polymerase chain reaction (PCR) adalah diagnosis deteksi penyakit virus, berdasarkan metode rekayasa genetika. Ini banyak digunakan dalam mikrobiologi medis, imunologi dan virologi. Metode ini bersifat universal dan membantu membuat diagnosis dengan sejumlah kecil bahan. Infeksi dapat dideteksi secara harfiah pada jam-jam pertama infeksi itu, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Metode ini terdiri dari memperoleh dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi fragmen genom (partikel DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya ke kelas mikroorganisme mana materi genetik yang diperoleh dimiliki dengan menggunakan metode genetik molekuler.

Terlepas dari kenyataan bahwa ini adalah proses yang kompleks, butuh waktu jauh lebih sedikit daripada banyak metode biologis untuk mendeteksi agen infeksi. Hanya dalam beberapa jam, mikroorganisme dapat dideteksi oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengisolasinya dari lingkungan (darah, cairan serebrospinal, sputum) dan menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi buatan. Sudah cukup bahwa fragmen kecil untai DNA dari agen infeksi hadir dalam bahan yang diteliti.

Dasar dari reaksi adalah kemungkinan di bawah kondisi buatan (in vitro) untuk membuat sintesis molekul asam nukleat dari agen infeksi.

Apa yang dibutuhkan untuk PCR?

1. Primer adalah segmen DNA dari mana biosintesis atau penciptaan dimulai.
2. Nukleotida atau senyawa kompleks yang menjadi dasar molekul DNA atau RNA.
3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin terjadi tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahapan diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekuler dilakukan oleh PCR? Prosedurnya sederhana dan membutuhkan waktu singkat, dengan mempertimbangkan pengumpulan materi.

1. Sebelum memulai penelitian, mereka mengambil bahan biologis yang diperlukan - ini adalah air cuci bronkial, darah, isi lambung, dahak. Jenis bahan biologis tergantung pada patogen yang dicurigai.
2. Denaturasi atau penghancuran struktur primer DNA, yang terdiri dari dua rantai. Inti dari tahap ini adalah untuk memisahkan dua sirkuit di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang berlangsung tidak lebih dari dua menit).
3. Pada tahap PCR berikutnya, yang disebut anil, suhu berkurang beberapa derajat sehingga primer akan mengikat untai DNA.
4. Perpanjangan, di mana sintesis molekul yang diinginkan berlangsung secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 siklus yang menerima jumlah salinan DNA mikroorganisme yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Apakah PCR memerlukan diagnosis TB?

Tidak mungkin bagi semua orang yang dicurigai tuberkulosis untuk melakukan PCR, karena metode ini membutuhkan peralatan yang mahal. Tidak semua klinik umum mampu membelinya. Selain itu, kebetulan bahwa metode biasa dalam mendiagnosis infeksi pada kebanyakan kasus juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

• survei pasien, anamnesis;
• pemeriksaan lengkap dari orang tersebut;
• sebuah studi menggunakan tes tuberkulin Mantoux;
• radiografi atau fluorografi;
• diagnostik komputer jika perlu;
• metode penelitian mikrobiologis: pemeriksaan mikroskopik dan pemeriksaan bakteriologis dahak.

PCR untuk TBC dilakukan dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental lainnya.

Meskipun ada banyak metode diagnostik, kejadian TB terus bertambah. Saat ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga fitur lainnya:

• penyakit ini sering terjadi dalam bentuk yang parah;
• jumlah kasus fatal meningkat;
• semakin resisten terhadap kemoterapi modern didiagnosis bentuk penyakit.

Keengganan orang itu sendiri untuk menjalani pemeriksaan medis rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi mengarah pada penyebaran tuberkulosis. Dalam kondisi seperti itu, kita memerlukan metode penelitian yang cepat, informatif dan efektif yang harus dapat diakses oleh anak-anak dan orang dewasa. Semua metode diagnostik di atas jauh lebih rendah daripada PCR.

Manfaat mendiagnosis TB dengan PCR

Penelitian ini, meskipun baru, telah membuktikan dirinya dengan baik, terutama dalam kasus kontroversial di mana tidak mungkin untuk membuat diagnosis karena sejumlah alasan.

Berkat PCR, jauh lebih mudah untuk mendeteksi agen penyebab TBC dalam bahan uji.

Keuntungan dari diagnosa PCR adalah sebagai berikut.

1. Ini adalah analisis cepat. Sebuah fragmen kecil dari molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi darurat ketika, misalnya, sebelum operasi perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit dengan TBC.
2. Analisis PCR diperbolehkan jika metode lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mendeteksi TB paru, kadang-kadang Anda harus mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi radiasi dosis besar).
3. Dengan bantuan PCR, setiap lingkungan biologis diperiksa untuk mengetahui adanya patogen di dalamnya. Misalnya, Anda dapat melakukan penelitian cairan serebrospinal, jika ada kecurigaan meningitis tuberkulosis.
4. Diizinkan diagnosis PCR penyakit menular pada anak-anak, karena metode ini aman.
5. Memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen pada setiap tahap penyakit.
6. Sensitivitas PCR yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, bahkan jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam bahan biologis.
7. Adalah baik untuk melakukan diagnosis kekambuhan penyakit.

Setelah semua membaca PCR tampaknya metode diagnostik yang hampir sempurna, yang harus membuat semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka harus diperhitungkan.

Kekurangan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Saat ini, diagnostik semacam itu lebih jarang terjadi daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasannya.

1. Ini adalah metode penelitian yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak ada karena biayanya yang tinggi, tetapi analisis masih dapat dilakukan di laboratorium berbayar.
2. Segera setelah perawatan, mikobakteri mati atau hidup dalam jumlah kecil mungkin masih ada dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif selama diagnosa PCR), sehingga metode ini tidak dapat diandalkan saat ini, tidak masuk akal untuk melakukannya.
3. Mutasi mikobakteri menyebabkan PCR tidak efektif - urutan untai DNA normal tidak dapat disintesis.
4. Penting untuk memilih lingkungan yang tepat untuk penelitian, darah diambil hanya jika diduga terinfeksi (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada masalah tuberkulosis organ sistem saraf. Dalam hal ini, PCR tidak akan dapat mendeteksi patogen dan diagnosis tidak akan informatif.

Indikasi untuk mendeteksi TB menggunakan analisis PCR

Diagnosis PCR tuberkulosis dilakukan paling sering pada kasus kontroversial. Kapan dokter merujuk penelitian ini?

1. Jika sulit untuk membuat diagnosis menggunakan metode yang tersedia biasa, tetapi ada kontak dengan pasien dengan TBC.
2. Dalam kasus ketika seseorang tidak dapat dikirim ke klinik untuk menjalani tes rutin rutin untuk TB, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan PCR, karena dahak untuk tes dapat dikirim dalam toples dan diagnosa dikonfirmasi dalam beberapa jam.
3. Jika seseorang akan menjalani operasi darurat dan sangat mendesak untuk mengetahui apakah dia sakit TBC.
4. Jika perlu, seorang wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa TBC menggunakan PCR, karena metode ini aman.
5. Pada basis berbayar, siapa pun yang belum didiagnosis dengan TB telah dikonfirmasi menggunakan metode bakteriologis dan fluoroskopi. Hal ini terjadi ketika lesi di paru-paru tidak terlihat dalam gambar langsung, dan orang selama pengiriman dahak untuk penelitian tidak dapat mengikuti rekomendasi untuk pengumpulan bahan yang benar. Dalam hal ini, orang tersebut khawatir tentang semua gejala karakteristik TB paru.
6. Ketika ada keraguan tentang hasil tes Mantoux.
7. Lebih disukai untuk melakukan diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak. Prosedur ini aman, tidak menciptakan paparan radiasi tambahan, dan efektif dalam mendeteksi bentuk penyakit yang sulit didiagnosis.

Diagnosis tuberkulosis yang tepat waktu adalah kunci untuk perawatan yang diresepkan dengan benar dan mengurangi penyebaran penyakit. Seringkali, metode deteksi penyakit yang sudah dikenal tidak selalu efektif. Oleh karena itu, PCR saat ini adalah salah satu cara yang paling dapat diandalkan dan aman untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal perkembangannya.

Mycobacterium tuberculosis, DNA [PCR waktu-nyata]

Sebuah studi untuk mengidentifikasi agen penyebab tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis), di mana bahan genetik (DNA) dari mycobacterium dalam sampel biomaterial ditentukan menggunakan reaksi rantai polimerase (RT-PCR) waktu-nyata.

Sinonim Rusia

Tuberkulosis, Mycobacterium tuberculosis, Koch sticks.

Sinonim bahasa Inggris

Tuberkulosis, basil Tubercle, bacillus Koch.

Metode penelitian

Reaksi berantai polimerase waktu nyata.

Biomaterial apa yang dapat digunakan untuk penelitian?

Darah vena, biopsi, sel endometrium uterus, cairan serebrospinal, apusan urogenital (dengan sekresi prostat), dahak, cairan pleura, bagian pertama urin pagi hari, ejakulasi.

Bagaimana cara mempersiapkan studi?

Tidak diperlukan pelatihan.

Informasi umum tentang penelitian ini

Tuberculosis (dari bahasa Latin. Tuberculum - "tubercle") - penyakit menular pada manusia dan hewan, ditularkan terutama oleh tetesan di udara. Risiko infeksi meningkatkan penekanan kekebalan yang disebabkan oleh HIV / AIDS, diabetes, penyakit ginjal, transplantasi organ dan penggunaan imunosupresan, kehamilan, penuaan. Selain itu, mereka yang bersentuhan dengan pasien dengan TB, serta anak di bawah 5 tahun setelah tes TB paling rentan terhadap itu. Kelompok populasi yang paling rentan termasuk orang-orang yang tidak memiliki rumah, tahanan, migran dari negara-negara dengan insiden tuberkulosis yang tinggi, pengguna narkoba, dan manula.

Untuk penelitian ini, sistem uji yang didasarkan pada deteksi DNA genom dari agen penyebab tuberkulosis menggunakan reaksi rantai polimerase waktu nyata (PCR) digunakan (PCR waktu nyata). Dalam diagnosa modern, ini adalah salah satu metode tercepat, paling fleksibel dan sangat sensitif.

Metode standar untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis didasarkan pada budidaya mikroorganisme patogen dalam media nutrisi. Kesulitan yang terkait dengan tingkat pertumbuhan koloni Mycobacterium tuberculosis yang rendah - harus diperkirakan hingga 1,5 bulan setelah mengambil bahan tersebut.

Metode biologi molekuler berdasarkan deteksi bahan genetik mycobacterium tuberculosis memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi. Keuntungan terpenting mereka adalah kecepatan tinggi dalam mendapatkan hasil. Menggunakan PCR secara real-time memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi agen penyebab TB pada hari penerimaan sampel klinis.

Bakteremia (mikobakterium memasuki aliran darah pasien) dapat terjadi pada tahap awal infeksi TBC, serta dalam pengembangan TBC umum atau ekstrapulmoner. Ini berbahaya karena respons imun terhadap bakteri akan menyebabkan sepsis dan syok septik, yang penuh dengan kematian. Risiko mengembangkan TB umum adalah tertinggi pada pasien dengan HIV pada tahap selanjutnya, di antara mereka yang telah menghentikan terapi anti-TB, dan juga di antara mereka yang tidak mencari bantuan medis pada waktunya untuk timbulnya gejala TB.

Diagnosis TB pada orang yang terinfeksi HIV sulit karena keadaan tubuh yang tertekan kekebalannya, yang sering memanifestasikan dirinya dalam hasil negatif palsu dari reaksi tuberkulin dan tes mikrobiologis. Dalam hal ini, pengujian Mycobacterium tuberculosis oleh PCR real-time sangat penting.

Untuk apa penelitian itu digunakan?

• Untuk mendiagnosis tuberkulosis paru (khususnya, generalisasi dan ekstrapulmoner, terkait dengan bakteremia, bentuk), dan pantau pengobatannya.

Kapan studi dijadwalkan?

• Saat dicurigai TB luar paru.
• Dengan gejala bakteremia pada latar belakang infeksi TBC: peningkatan suhu tubuh, berkeringat, dll. (Dengan sejumlah kecil bakteri dalam darah, bakteremia mungkin asimptomatik).
• Jika pasien telah lama kontak dengan pasien dengan tuberkulosis.
• Dengan reaksi abnormal terhadap tes tuberkulin pada anak-anak.
• Ketika seorang pasien memiliki infeksi HIV.

Apa artinya hasil?

Nilai referensi: negatif.

• Kehadiran patogen dalam biomaterial yang diteliti. Biasanya terjadi dengan TBC aktif yang membutuhkan perawatan. Mengidentifikasi sejumlah besar mikobakteri sering menunjukkan bentuk TB luar paru atau generalisasi infeksi.

• Agen penyebab TBC tidak terdeteksi. Bakteremia tidak ada.

Apa yang bisa mempengaruhi hasilnya?

Terapi anti-TB yang efektif dari waktu ke waktu menyebabkan hilangnya mikobakteri dalam materi klinis.

Catatan penting

Untuk meresepkan rejimen pengobatan yang benar ketika seorang pasien didiagnosis dengan TB, perlu untuk melakukan tes untuk sensitivitas mikobakteri terhadap obat anti-TB.

Juga disarankan

Siapa yang membuat studi?

Dokter umum, ahli terapi, ahli fisiologi, ahli urologi, dokter kandungan, spesialis penyakit menular.