Cara melakukan analisis oleh PCR: deskripsi prosedur

Faringitis

Reaksi rantai polimerase telah dikenal selama 30 tahun. Ini banyak digunakan di banyak bidang, dari arkeologi hingga genetika.

Ini adalah metode PCR yang membantu untuk membentuk ayah, tetapi paling sering digunakan untuk mengidentifikasi berbagai penyakit menular dalam tubuh manusia.

Bagaimana analisis PCR dilakukan, dan apa itu? Kami akan mencoba menjawab pertanyaan-pertanyaan ini secara rinci.

Analisis PCR - apa itu?

Polymerase chain reaction (PCR) adalah metode presisi tinggi diagnosis genetik molekuler, yang memungkinkan untuk mendeteksi berbagai penyakit menular dan herediter pada manusia, baik dalam tahap akut dan kronis, dan jauh sebelum penyakit dapat memanifestasikan dirinya.

Metode PCR benar-benar spesifik dan dilakukan dengan benar tidak dapat memberikan hasil positif palsu. Artinya, jika tidak ada infeksi, analisis tidak akan pernah menunjukkan apa itu. Oleh karena itu, sekarang sangat sering untuk persetujuan diagnosis, analisis PCR tambahan diambil untuk menentukan agen penyebab dan sifatnya.

Polymerase chain reaction (PCR) pada tahun 1983, dikembangkan oleh Carey Mulllis (AS), yang pada tahun 1993 ia dianugerahi Hadiah Nobel dalam Kimia.

Apa keuntungan dari metode ini?

Diagnosis dengan metode ini memungkinkan seseorang untuk menemukan patogen secara langsung pada gen yang terkandung dalam bahan yang diteliti. Ini adalah analisis infeksi genital yang paling akurat, infeksi tersembunyi, berbagai penyakit menular seksual.

Perbedaan diagnosa PCR dari metode penelitian laboratorium lainnya adalah sebagai berikut:

  • metode ini bertujuan mengidentifikasi patogen itu sendiri;
  • Diagnosis PCR bersifat universal: untuk mendeteksi beberapa patogen;
  • penyakit, hanya satu sampel biologis pasien cukup;
  • metode ini sangat sensitif dan tidak disertai dengan reaksi silang lainnya.

Selain itu, keuntungan dari diagnosa PCR adalah bahwa setiap bahan biologis pasien cocok untuk analisis: darah, keluarnya cairan dari alat kelamin, air seni, air mani.

Infeksi apa yang dapat ditemukan pada apus pada PCR?

Sejumlah besar patogen mungkin ada di dalam tubuh, termasuk yang "tersembunyi" yang tidak memanifestasikan diri untuk waktu yang lama.

Analisis apusan pada PCR memungkinkan untuk mengungkapkan infeksi seperti:

Bahan uji untuk PCR biasanya dahak, saliva, urin, dan darah. Sebelum analisis, Anda harus mempersiapkannya dengan hati-hati, setelah menerima konsultasi awal dengan dokter.

Darah untuk PCR biasanya diberikan pada saat perut kosong. Hasil yang baik menunjukkan analisis ketika bahan untuk penelitian ini diambil dari saluran serviks atau uretra. Dalam hal ini, yang terbaik adalah melakukan diagnosa PCR selambat-lambatnya satu hari setelah hubungan seksual.

Varietas PCR

PCR digunakan di banyak bidang untuk analisis dan eksperimen ilmiah. Ada berbagai metode analisis:

  1. Reverse transcription PCR (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (Bahasa Inggris)) digunakan untuk memperkuat, mengisolasi atau mengidentifikasi urutan yang diketahui dari perpustakaan RNA.
  2. Inverted PCR (Inverse PCR (Eng.)) - digunakan jika hanya sebagian kecil yang diketahui dalam urutan yang diinginkan. Metode ini sangat berguna ketika perlu untuk menentukan urutan yang berdekatan setelah penyisipan DNA ke dalam genom.
  3. Nested PCR (Nested PCR) digunakan untuk mengurangi jumlah produk samping reaksi. Dua pasang primer digunakan dan dua reaksi berturut-turut dilakukan.
  4. Asymmetric PCR (Asymmetric PCR) dilakukan ketika perlu untuk memperkuat terutama salah satu rantai DNA asli. Digunakan dalam beberapa pengujian sekuensing dan hibridisasi.
  5. PCR Kuantitatif (PCR Kuantitatif, Q-PCR (Eng.)) Atau PCR real-time digunakan untuk secara langsung memantau pengukuran jumlah produk PCR tertentu dalam setiap siklus reaksi.
  6. Langkah PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - menggunakan pendekatan ini mengurangi efek pengikatan primer yang tidak spesifik.
  7. PCR khusus grup (PCR khusus grup) - PCR untuk sekuens terkait dalam satu atau antara spesies yang berbeda, menggunakan primer konservatif untuk sekuens ini.

Jika urutan nukleotida dari matriks sebagian atau tidak diketahui, dimungkinkan untuk menggunakan primer degenerasi, urutan yang berisi posisi degenerasi di mana basis dapat ditemukan. Misalnya, urutan primernya mungkin:... ATH..., di mana H adalah A, T, atau C.

Bahan biologis apa yang sedang diselidiki?

Bahan untuk studi PCR, di mana DNA bakteri asing dapat dideteksi atau DNA virus atau RNA, dapat terdiri dari berbagai media biologis dan cairan manusia:

  1. Urin. Hal ini dapat digunakan untuk infeksi saluran urogenital pada pria dan organ kemih pada wanita (pada pria, penggunaan urin sebagai bahan menggantikan goresan epitel).
  2. Dahak Ini digunakan untuk mendiagnosis TB dan lebih jarang untuk mendiagnosis bentuk pernapasan klamidia dan mikoplasmosis. Dahak dalam jumlah 15-20 ml dikumpulkan dalam botol steril (sekali pakai).
  3. Cairan biologis. Jus prostat, pleural, serebrospinal, amniotik, cairan artikular, lavage bronchoalveolar, air liur diambil sesuai indikasi.
  4. Kerokan epitel dari selaput lendir. Umumnya digunakan untuk mendiagnosis penyakit menular seksual (PMS), seperti gonore, klamidia, mikoplasmosis, ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellezis, herpes dan infeksi lain yang mempengaruhi selaput lendir.
  5. Biopsi. Biopsi lambung dan duodenum yang paling umum digunakan untuk mengidentifikasi infeksi Helicobacter pylori.
  6. Darah, plasma, serum. Digunakan untuk analisis PCR untuk virus hepatitis B, C, D, G, herpes, CMV, HIV, gen manusia.

Bagaimana cara mempersiapkan analisis?

Keandalan hasil PCR secara langsung tergantung pada kebenaran pengiriman bahan untuk diperiksa. Materi tidak boleh terkontaminasi, jika tidak, hasil penelitian tidak akan objektif. Rekomendasi paling penting sebelum mengirimkan analisis PCR adalah persyaratan berikut:

  1. Urin dikirim di pagi hari dalam wadah steril.
  2. Tes darah untuk infeksi harus dilakukan pada perut kosong di pagi hari.
  3. Tidak perlu menunjukkan aktivitas seksual sehari sebelum analisis.

Hasil analisis akan siap dalam 1,5-2 hari setelah prosedur. Ada beberapa situasi ketika hasilnya dapat disiapkan pada hari yang sama.

Decoding analisis CRP

Proses interpretasi dari penelitian yang disajikan dibedakan oleh kesederhanaannya. Hasil analisis PCR dapat diperoleh dalam 1,5-2x hari setelah pengiriman materi. Dalam beberapa kasus, hasilnya siap pada hari pertama, dan inilah yang mereka maksud:

  • Hasil negatif menunjukkan bahwa agen infeksi tidak ada dalam materi yang didiagnosis.
  • Pcr positif berarti bahwa DNA atau RNA patogen hadir dalam tubuh manusia.

Dalam beberapa kasus, menghasilkan penentuan mikroorganisme secara kuantitatif. Ini terutama berlaku untuk penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme oportunistik. Karena bakteri ini menunjukkan dampak negatifnya hanya dengan jumlah berlebih.

Juga, analisis kuantitatif PCR adalah penting untuk pilihan taktik terapi dan untuk mengendalikan pengobatan infeksi virus seperti HIV dan virus hepatitis.

Seberapa akurat diagnosa infeksi PCR?

Metode PCR ditandai dengan akurasi, spesifisitas, dan sensitivitas yang tinggi. Ini berarti bahwa analisis ini mampu:

  • secara akurat menentukan ada atau tidak adanya infeksi;
  • tentukan secara pasti jenis infeksi apa (kekhususan);
  • mendeteksi infeksi bahkan dengan kandungan DNA mikroba yang sangat rendah dalam bahan biologis,
  • yang telah menjadi subjek penelitian (sensitivitas).

Analisis PCR: harga dan waktu

Harga analisis spesifik akan tergantung pada infeksi yang Anda periksa. Perkiraan harga dan ketentuan:

  1. IMS: 300-500 rubel, waktu - 1 hari;
  2. Virus Epstein-Barr, human papillomavirus, virus herpes, cytomegalovirus: 300-500 rubel, istilah - 1 hari;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: analisis kualitatif 650 rubel, analisis kuantitatif 2000 rubel. Ketentuan - hingga 5 hari;
  4. Antibodi terhadap virus hepatitis C, total (Anti-HCV) - 420 rubel;
  5. Antibodi terhadap virus hepatitis C, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubel;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubel, syarat - 1 hari;
  7. HIV (antibodi dan antigen) - 380 rubel;
  8. RNA HIV, secara kualitatif - 3.500 rubel;
  9. RNA HIV, secara kuantitatif - 11.000 rubel.

Untuk menghemat uang, Anda dapat memilih kumpulan analisis yang tetap. Layanan ini disediakan oleh sebagian besar klinik di mana dimungkinkan untuk lulus analisis dengan metode ERP (invitro, onclinics, dll.).

Diagnosis PCR tuberkulosis

TBC adalah infeksi spesifik, fokusnya mungkin pada jaringan manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronis yang rejimen pengobatan optimalnya sulit dipilih. Salah satu alasan untuk ini adalah keterlambatan diagnosis, ketika mikobakteri, sementara di tubuh manusia, telah beradaptasi dengan banyak obat.

Apa metode diagnosis modern yang ada? Diagnosis PCR - apa itu? Bagaimana penelitian ini dilakukan? Dalam kasus apa TBC didiagnosis dengan metode ini dan apa esensinya?

Apa itu diagnosa PCR

Ini adalah salah satu metode paling modern untuk mendiagnosis tidak hanya penyakit, tetapi juga deteksi bahan biologis. Diagnosis PCR ditemukan relatif baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang ahli biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mengusulkan skema pemulihan yang kompleks untuk bahan biologis mikroorganisme dalam satu segmen pendek. Berkat penemuannya, ilmuwan dianugerahi penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Apa itu - PCR diagnosis infeksi? Polymerase chain reaction (PCR) adalah diagnosis deteksi penyakit virus, berdasarkan metode rekayasa genetika. Ini banyak digunakan dalam mikrobiologi medis, imunologi dan virologi. Metode ini bersifat universal dan membantu membuat diagnosis dengan sejumlah kecil bahan. Infeksi dapat dideteksi secara harfiah pada jam-jam pertama infeksi itu, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Metode ini terdiri dari memperoleh dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi fragmen genom (partikel DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya ke kelas mikroorganisme mana materi genetik yang diperoleh dimiliki dengan menggunakan metode genetik molekuler.

Terlepas dari kenyataan bahwa ini adalah proses yang kompleks, butuh waktu jauh lebih sedikit daripada banyak metode biologis untuk mendeteksi agen infeksi. Hanya dalam beberapa jam, mikroorganisme dapat dideteksi oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengisolasinya dari lingkungan (darah, cairan serebrospinal, sputum) dan menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi buatan. Sudah cukup bahwa fragmen kecil untai DNA dari agen infeksi hadir dalam bahan yang diteliti.

Dasar dari reaksi adalah kemungkinan di bawah kondisi buatan (in vitro) untuk membuat sintesis molekul asam nukleat dari agen infeksi.

Apa yang dibutuhkan untuk PCR?

  1. Primer adalah segmen DNA dari mana biosintesis atau penciptaan dimulai.
  2. Nukleotida atau senyawa kompleks yang menjadi dasar molekul DNA atau RNA.
  3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin terjadi tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahapan diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekuler dilakukan oleh PCR? Prosedurnya sederhana dan membutuhkan waktu singkat, dengan mempertimbangkan pengumpulan materi.

  1. Sebelum memulai penelitian, mereka mengambil bahan biologis yang diperlukan - ini adalah air cuci bronkial, darah, isi lambung, dahak. Jenis bahan biologis tergantung pada patogen yang dicurigai.
  2. Denaturasi atau penghancuran struktur primer DNA, yang terdiri dari dua rantai. Inti dari tahap ini adalah untuk memisahkan dua sirkuit di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang berlangsung tidak lebih dari dua menit).
  3. Pada tahap PCR berikutnya, yang disebut anil, suhu berkurang beberapa derajat sehingga primer akan mengikat untai DNA.
  4. Perpanjangan, di mana sintesis molekul yang diinginkan berlangsung secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 siklus yang menerima jumlah salinan DNA mikroorganisme yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Apakah PCR memerlukan diagnosis TB?

Tidak mungkin bagi semua orang yang dicurigai tuberkulosis untuk melakukan PCR, karena metode ini membutuhkan peralatan yang mahal. Tidak semua klinik umum mampu membelinya. Selain itu, kebetulan bahwa metode biasa dalam mendiagnosis infeksi pada kebanyakan kasus juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

  • survei pasien, anamnesis;
  • pemeriksaan lengkap dari orang tersebut;
  • sebuah studi menggunakan tes tuberkulin Mantoux;
  • radiografi atau fluorografi;
  • diagnostik komputer jika perlu;
  • metode penelitian mikrobiologis: pemeriksaan mikroskopik dan pemeriksaan bakteriologis dahak.

PCR untuk TBC dilakukan dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental lainnya.

Meskipun ada banyak metode diagnostik, kejadian TB terus bertambah. Saat ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga fitur lainnya:

  • penyakit ini sering terjadi dalam bentuk yang parah;
  • jumlah kasus fatal meningkat;
  • semakin resisten terhadap kemoterapi modern didiagnosis bentuk penyakit.

Keengganan orang itu sendiri untuk menjalani pemeriksaan medis rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi mengarah pada penyebaran tuberkulosis. Dalam kondisi seperti itu, kita memerlukan metode penelitian yang cepat, informatif dan efektif yang harus dapat diakses oleh anak-anak dan orang dewasa. Semua metode diagnostik di atas jauh lebih rendah daripada PCR.

Manfaat mendiagnosis TB dengan PCR

Penelitian ini, meskipun baru, telah membuktikan dirinya dengan baik, terutama dalam kasus kontroversial di mana tidak mungkin untuk membuat diagnosis karena sejumlah alasan.

Berkat PCR, jauh lebih mudah untuk mendeteksi agen penyebab TBC dalam bahan uji.

Keuntungan dari diagnosa PCR adalah sebagai berikut.

  1. Ini adalah analisis cepat. Sebuah fragmen kecil dari molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi darurat ketika, misalnya, sebelum operasi perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit dengan TBC.
  2. Analisis PCR diperbolehkan jika metode lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mendeteksi TB paru, kadang-kadang Anda harus mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi radiasi dosis besar).
  3. Dengan bantuan PCR, setiap lingkungan biologis diperiksa untuk mengetahui adanya patogen di dalamnya. Misalnya, Anda dapat melakukan penelitian cairan serebrospinal, jika ada kecurigaan meningitis tuberkulosis.
  4. Diizinkan diagnosis PCR penyakit menular pada anak-anak, karena metode ini aman.
  5. Memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen pada setiap tahap penyakit.
  6. Sensitivitas PCR yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, bahkan jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam bahan biologis.
  7. Adalah baik untuk melakukan diagnosis kekambuhan penyakit.

Setelah semua membaca PCR tampaknya metode diagnostik yang hampir sempurna, yang harus membuat semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka harus diperhitungkan.

Kekurangan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Saat ini, diagnostik semacam itu lebih jarang terjadi daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasannya.

  1. Ini adalah metode penelitian yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak ada karena biayanya yang tinggi, tetapi analisis masih dapat dilakukan di laboratorium berbayar.
  2. Segera setelah perawatan, mikobakteri mati atau hidup dalam jumlah kecil mungkin masih ada dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif selama diagnosa PCR), sehingga metode ini tidak dapat diandalkan saat ini, tidak masuk akal untuk melakukannya.
  3. Mutasi mikobakteri menyebabkan PCR tidak efektif - urutan untai DNA normal tidak dapat disintesis.
  4. Penting untuk memilih lingkungan yang tepat untuk penelitian, darah diambil hanya jika diduga terinfeksi (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada masalah tuberkulosis organ sistem saraf. Dalam hal ini, PCR tidak akan dapat mendeteksi patogen dan diagnosis tidak akan informatif.

Indikasi untuk mendeteksi TB menggunakan analisis PCR

Diagnosis PCR tuberkulosis dilakukan paling sering pada kasus kontroversial. Kapan dokter merujuk penelitian ini?

  1. Jika sulit untuk membuat diagnosis menggunakan metode yang tersedia biasa, tetapi ada kontak dengan pasien dengan TBC.
  2. Dalam kasus ketika seseorang tidak dapat dikirim ke klinik untuk menjalani tes rutin rutin untuk TB, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan PCR, karena dahak untuk tes dapat dikirim dalam toples dan diagnosa dikonfirmasi dalam beberapa jam.
  3. Jika seseorang akan menjalani operasi darurat dan sangat mendesak untuk mengetahui apakah dia sakit TBC.
  4. Jika perlu, seorang wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa TBC menggunakan PCR, karena metode ini aman.
  5. Pada basis berbayar, siapa pun yang belum didiagnosis dengan TB telah dikonfirmasi menggunakan metode bakteriologis dan fluoroskopi. Hal ini terjadi ketika lesi di paru-paru tidak terlihat dalam gambar langsung, dan orang selama pengiriman dahak untuk penelitian tidak dapat mengikuti rekomendasi untuk pengumpulan bahan yang benar. Dalam hal ini, orang tersebut khawatir tentang semua gejala karakteristik TB paru.
  6. Ketika ada keraguan tentang hasil tes Mantoux.
  7. Lebih disukai untuk melakukan diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak. Prosedur ini aman, tidak menciptakan paparan radiasi tambahan, dan efektif dalam mendeteksi bentuk penyakit yang sulit didiagnosis.

Diagnosis tuberkulosis yang tepat waktu adalah kunci untuk perawatan yang diresepkan dengan benar dan mengurangi penyebaran penyakit. Seringkali, metode deteksi penyakit yang sudah dikenal tidak selalu efektif. Oleh karena itu, PCR saat ini adalah salah satu cara yang paling dapat diandalkan dan aman untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal perkembangannya.

Analisis PCR

PCR (reaksi berantai polimerase) sejauh ini merupakan metode tercepat dan paling dapat diandalkan untuk mendiagnosis penyakit menular.

Prinsip metode reaksi rantai polimerase dikembangkan oleh Kary Mullis pada tahun 1983. Untuk penemuannya, K. Mullis pada tahun 1993 menerima Hadiah Nobel dalam Kimia.

Metode PCR memungkinkan untuk mencapai peningkatan yang signifikan dalam konsentrasi kecil fragmen asam nukleat tertentu (DNA) dalam bahan biologis (sampel). Metode ini didasarkan pada penggandaan selektif ganda (amplifikasi) pada bagian DNA tertentu menggunakan enzim dalam kondisi buatan.

Kelebihan metode diagnostik PCR sebagai metode diagnostik untuk penyakit menular

Deteksi patogen secara langsung

Banyak metode diagnostik tradisional, seperti enzim immunoassay, mendeteksi penanda protein yang merupakan produk dari aktivitas vital agen infeksi, yang hanya memberikan bukti tidak langsung adanya infeksi. Identifikasi wilayah DNA spesifik patogen oleh PCR memberikan indikasi langsung adanya patogen.

Spesifisitas tinggi

Spesifisitas tinggi dari metode PCR adalah karena fakta bahwa fragmen DNA yang unik terdeteksi pada bahan yang diteliti. Spesifisitas ditentukan oleh urutan nukleotida primer, yang mengecualikan kemungkinan memperoleh hasil yang salah, berbeda dengan metode analisis imunologis, di mana kesalahan dalam kaitannya dengan antigen reaksi silang sering terjadi.

Sensitivitas tinggi

Metode PCR memungkinkan untuk mendeteksi sel tunggal bakteri atau virus. Analisis PCR mengungkapkan adanya patogen penyakit menular dalam kasus di mana metode lain (imunologis, bakteriologis, mikroskopis) tidak dapat melakukan ini. Sensitivitas analisis PCR adalah 10-100 sel per sampel (sensitivitas uji imunologis dan mikroskopis adalah 103-105 sel).

Universalitas prosedur untuk mendeteksi berbagai patogen

Bahan untuk studi oleh PCR adalah DNA patogen. Metode ini didasarkan pada deteksi fragmen DNA atau RNA yang spesifik untuk organisme tertentu. Kesamaan komposisi kimia dari semua asam nukleat memungkinkan penggunaan metode penelitian laboratorium terpadu. Ini memungkinkan untuk mendiagnosis beberapa patogen dari bioassay tunggal.

Tingkat hasil analisis yang tinggi

Untuk analisis PCR, isolasi dan penanaman kultur patogen tidak diperlukan, yang membutuhkan banyak waktu. Metode terpadu pemrosesan biomaterial dan deteksi produk reaksi dan otomatisasi proses amplifikasi memungkinkan untuk melakukan analisis lengkap dalam 4-5 jam.

Kemampuan untuk mendiagnosis tidak hanya infeksi akut tetapi juga laten

Metode PCR sangat efektif untuk mendiagnosis mikroorganisme yang sulit diolah, tidak dibiakkan, dan persisten yang sering dijumpai pada infeksi laten dan kronis, karena metode ini menghindari kesulitan yang terkait dengan pertumbuhan mikroorganisme semacam itu di laboratorium. Penggunaan diagnostik PCR juga sangat efektif terhadap patogen dengan variabilitas antigenik yang tinggi dan parasit intraseluler.

Seberapa efektif pengujian dahak untuk TBC oleh PCR?

Untuk mengidentifikasi tongkat Koch pada manusia, berbagai metode diagnostik digunakan. Berkat dia, patologi dapat dideteksi bahkan pada tahap awal, yang meningkatkan peluang pasien untuk pulih. Analisis dahak untuk TBC adalah teknik yang paling dihargai dan cukup efektif. Apa itu dan berapa biaya analisis seperti itu?

Apa analisis dahak oleh PCR?

PCR adalah singkatan dari reaksi berantai polimerase. Metode ini efektif melawan penyakit menular. Untuk menegakkan diagnosis yang jelas, Anda tidak perlu mengumpulkan biomaterial dalam jumlah besar dan menunggu lama, seperti dalam kasus penaburan dahak.

Metode ini didasarkan pada memperoleh DNA dari partikel mikroorganisme. Selanjutnya, penelitian genetik molekuler akan menentukan jenis mikroorganisme apa yang harus mencakup bahan yang tersedia. Dalam kondisi tabung reaksi, seorang spesialis akan mensintesis molekul bakteri dan membuat kesimpulan yang tepat dalam beberapa jam.

Keefektifan

Analisis dahak untuk Mycobacterium tuberculosis efektif ketika tongkat Koch mengenai sistem pernapasan. Dalam hal ini, penyakit ini dapat dengan mudah diidentifikasi, bahkan pada jam-jam pertama infeksi.

Tetapi, analisis dahak tidak akan menunjukkan hasil yang andal jika TBC hadir:

  • tulang;
  • otak, sumsum tulang belakang;
  • sistem saraf;
  • sendi, dll.

Ahli phytisiatrician akan dapat menentukan jenis penyakit, dengan mempertimbangkan gejala saat ini dan mengandalkan hasil analisis umum dan lainnya.

Ini juga tidak sesuai untuk metode penelitian dalam kasus ketika Anda perlu melakukan analisis kontrol setelah pengobatan terapi penyakit. Hasilnya akan positif, seperti dalam tubuh, dalam hal apapun, masih ada IBC hidup atau mati. Lebih baik memberi preferensi pada prosedur diagnostik lain.

Kontraindikasi untuk metode ini

Dengan demikian, tidak ada kontraindikasi untuk pengujian sputum untuk tuberkulosis menggunakan PCR. Ada batasannya. Seperti disebutkan di atas, tidak perlu untuk melakukan itu setelah perawatan TBC. Hasilnya tidak akan berguna. Di sini diinginkan untuk menggunakan diagnosis yang berbeda.

Selain itu, tidak ada kendala lain untuk diagnosis ini. Dahak dapat diperiksa dalam kategori usia apa pun dan untuk penyakit terkait. Bahkan jika tidak ada pelepasan dahak yang banyak, analisis dapat dilakukan dengan mengambil lendir menggunakan bronkoskopi.

Manfaat

Dalam metode ini, massa plus, ini termasuk:

  1. Spesifisitas dan sensitivitas tinggi. Hanya agen penyebab TBC yang terdeteksi. Tidak ada jawaban yang salah jika semua nuansa prosedur diperhitungkan. Mycobacteria terdeteksi bahkan ketika jumlahnya minimum. Bahkan jika ada 10 sel abnormal dalam bahan yang dikumpulkan, infeksi akan terdeteksi.
  2. Kecepatan mendapatkan jawaban. Berapa banyak analisis yang dilakukan? Setelah 3-5 jam, Anda bisa mendapatkan hasilnya. Tidak perlu melakukan kultur sputum untuk TBC, dan ini mengurangi waktu.
  3. Anda dapat mengidentifikasi sebagai infeksi tersembunyi, dan infeksi akut.
  4. Tidak ada kontraindikasi absolut. Hal ini memungkinkan untuk melaksanakan prosedur untuk semua orang tanpa kecuali (bahkan untuk anak kecil), dan terutama ketika metode lain tidak terselesaikan.
  5. Dengan bantuan diagnostik PCR, berbagai biomaterial (urin, feses, darah, air liur, cairan serebrospinal, dll.) Dipelajari.
  6. Metode ini mengungkapkan TBC pada tahap awal, pada jam-jam pertama setelah infeksi.
ke konten ↑

Kekurangan

Selain sisi positif, ada juga sisi negatifnya. Ini adalah:

  1. Analisis PCR adalah "kesenangan" yang mahal. Selain itu, peralatan yang diperlukan untuk implementasinya tidak tersedia di setiap pusat medis. Di klinik jarang ditemukan, karena nilainya juga bagus. Jika kita berbicara tentang klinik swasta, maka ya, Anda dapat menemukan diagnosis semacam ini. Biarkan dirinya, sayangnya, tidak bisa semua orang.
  2. Ini menunjukkan hasil positif palsu pada orang-orang yang baru saja menjalani pengobatan TB.
  3. Jika MBC dimutasi, metode ini juga dapat memberikan hasil yang salah.
  4. Jika materi dikumpulkan secara tidak benar, atau spesialis yang melakukan penelitian memiliki tingkat kualifikasi yang tidak memadai, maka kerusakan juga dimungkinkan. Dalam beberapa kasus, prosedur harus diulang beberapa kali dan setiap kali pembayaran diulang.
ke konten ↑

Persiapan untuk analisis

Agar bahan menjadi berkualitas tinggi, ia harus dipasang dengan benar dan dipersiapkan dengan benar.

Ada aturan tertentu untuk mengumpulkan dahak untuk TBC. Algoritme tindakan adalah sebagai berikut:

  1. Bahkan pada malam hari, di malam hari seseorang perlu minum ekspektoran (jika dahak bergerak buruk). Bahkan jika itu tidak membantu, inhalasi harus dilakukan berdasarkan obat pengencer dan ekspektoran. Dengan tidak adanya dahak, pasien ditargetkan untuk bronkoskopi. Selama prosedur inilah bahan untuk penelitian diambil.
  2. Beli wadah khusus terlebih dahulu. Itu steril dan kedap udara, jadi tidak ada tambahan yang bisa ditempatkan di sana, serta dibuka terlebih dahulu.
  3. Ruangan tempat pengumpulan dahak harus berventilasi baik. Hal ini diperlukan untuk membuka jendela, pintu, nyalakan kap mesin. Pilihan lain yang baik adalah untuk mendapatkan udara segar (misalnya, ke balkon atau ke halaman).
  4. Segera sebelum prosedur, Anda harus memperingatkan semua orang sehingga tidak ada yang memasuki ruangan di mana semuanya akan terjadi. Seharusnya tidak ada mikropartikel tambahan dalam biomaterial - ini penting.
  5. Makan sebelum memetik tidak dianjurkan.
  6. Bilas mulut dan tenggorokan.
  7. Air liur dimuntahkan. Kapasitasnya harus jatuh minimum.
  8. Dengan batuk, seseorang mengeluarkan dahak dan meludahkannya ke dalam wadah yang sudah disiapkan. Setelah prosedur, tutup dengan rapat dan bawa sampel ke laboratorium.

Bagaimana cara mengumpulkan dahak harus memberi tahu dokter. Jika pasien tidak berani melakukannya sendiri, maka petugas kesehatan datang untuk menyelamatkan. Selama manipulasi, mereka mengenakan topeng pelindung khusus. Mengumpulkan dahak akan berada di ruangan khusus, di mana tidak ada jalan bagi orang asing. Jika pasien tidak dapat datang ke klinik, spesialis datang ke rumahnya dan membantu mengumpulkan lendir.

Jika bronkoskopi dilakukan, maka pasien disuntikkan ke dalam trakea dengan alat - bronkoskop. Dengan bantuannya bahan diambil.

Untuk keandalan, disarankan untuk lulus analisis tiga kali, yaitu:

  • di pagi hari dengan perut kosong;
  • setelah pertama kali setelah 4-5 jam;
  • 24 jam setelah studi pertama dan juga sebelum makan.
ke konten ↑

Bagaimana analisis ini dilakukan?

Melewati tes dahak untuk TBC hanya sebagian dari pekerjaan. Utama di depan. Banyak tergantung pada seberapa siap spesialis.

Kursus studi adalah sebagai berikut:

  1. Spesialis melanjutkan ke penghancuran struktur primer DNA (denaturasi). Ada dua rantai di sini. Pada suhu tinggi, mereka terpisah.
  2. Pada tahap selanjutnya, suhu berkurang (anil). Ini diperlukan untuk koneksi untai DNA dengan primer.
  3. Tahap ketiga adalah pemanjangan. Di sini molekul yang diperlukan disintesis.
ke konten ↑

Hasil decoding

Mycobacterium tuberculosis dalam dahak oleh PCR dapat dideteksi atau tidak. Hasil positif didasarkan pada kenyataan bahwa ada DNA stick Koch di dalam biomaterial. Ini menunjukkan bahwa orang tersebut terinfeksi. Dengan negatif - 98% dari fakta bahwa subjek tidak terinfeksi.

Indikator dapat dinilai berdasarkan:

  • fase patologi apa (laten atau aktif);
  • seberapa banyak tubuh terpengaruh;
  • apakah pengobatan yang dipilih efektif dalam kasus tertentu.

Ingatlah bahwa tidak ada yang menyeluruh. Oleh karena itu, mungkin ada hasil positif palsu atau negatif palsu. Untuk memastikan kebenarannya, prosedur diagnostik lain disarankan atau PCR dilakukan dua kali (tiga kali).

Analisis biaya di berbagai pusat

Anda dapat memberikan dahak untuk PCR di berbagai klinik. Mari kita berikan contoh beberapa pusat Moskow populer dengan kebijakan penetapan harga.

Metode untuk menguji dahak untuk TBC

Analisis dahak untuk TBC termasuk dalam serangkaian tindakan diagnostik yang diperlukan untuk mengidentifikasi dan mengklarifikasi diagnosis. Konten dahak akan membantu membuat rejimen pengobatan yang kompeten.

Cara lulus tes dahak untuk TBC

Dokter telah mengembangkan aturan untuk mengambil analisis. Air liur dikumpulkan di pagi hari, sebelum orang tersebut sarapan. Pertama, pasien melakukan prosedur kebersihan:

  • pembersihan enamel gigi;
  • pembilasan menyeluruh dengan air bersih rongga mulut dan faring.

Kemudian mulailah pengiriman materi secara langsung untuk analisis. Bagaimana cara lulus tes dahak? Persyaratan untuk prosedur:

  1. Persiapan dimulai di muka, di malam hari. Pasien dianjurkan untuk minum obat khusus yang akan membuat sekresi paru lebih alami. Ini adalah senyawa ekspektoran dan penipisan. Jika prosedur seperti itu tidak membantu, lakukan inhalasi dengan komposisi farmasi untuk ekspektasi.
  2. Siapkan wadah untuk dahak. Lendir harus dikumpulkan dalam piring yang disterilkan, ditutup rapat, rapat.
  3. Sebelum melahirkan, batuk dan ludahkan dalam wadah. Volume air liur tidak boleh besar, membutuhkan dahak dari laring. Bakteri rongga mulut tidak termasuk dalam analisis.
  4. Kumpulkan air liur di ruangan dengan ventilasi yang sangat baik. Analisis dilakukan dengan membuka jendela di atas pintu, menjalankan kap mesin. Disarankan untuk membuka jendela, atau pergi ke udara segar.

Selama prosedur di ruangan dilarang masuk. Orang luar dapat berkontribusi pada mikroflora kantor, dan dengan demikian ke dahak, formasi patologis. Petugas medis menerima analisis dalam masker khusus (respirator).

Analisis dahak untuk transkrip TB

Decoding dimulai dengan melihat penampilan lendir. Patologi mencirikan perubahan warna - menjadi gelap, dengan campuran darah yang terlihat. Warna bukan indikator utama. Dahak menjadi gelap karena minum anggur merah, gairah kopi. Beberapa obat dan minuman berwarna mengubah penampilan lendir.

Bahan yang dikumpulkan diuraikan oleh dua indikator, yaitu, dokter mendapatkan dua hasil:

Jawaban positif

Analisis dahak yang dihasilkan menegaskan adanya penyakit dalam tubuh. Yang menegaskan ini:

  • benda asing atau inklusi yang tidak diketahui;
  • adanya gumpalan lendir;
  • garis-garis yang terlihat;
  • bau bernanah yang tidak menyenangkan atau infeksi;
  • nanah.

Metode penelitian makroskopis menyediakan data lain:

  • konvolusi fibrinous;
  • Formasi tongkat lensa Koch;
  • produk dari dekomposisi dekomposisi zat bakteri;
  • sisa-sisa proses patologis di jaringan paru-paru.

Hasil positif mengungkapkan peningkatan jumlah senyawa protein. Mencapai 100-120g / l.

Metode mikroskopis lain memungkinkan untuk mengidentifikasi elemen berbahaya lainnya:

  • makrofag alveolar;
  • komposisi leukosit yang terlalu tinggi;
  • tingkat limfosit yang tinggi.

Untuk TBC, seseorang sering mencoba meludah dari mulutnya. Hemoptisis meningkatkan pembentukan sel darah merah. Volume air liur di mulut sedemikian rupa sehingga seseorang tidak bisa menelannya tanpa memperhatikan. Lebih dari dalam kondisi sehat.

Jawaban negatif

Studi ini menunjukkan bahwa jumlah leukosit kecil, sesuai dengan norma. Microbacteria juga tidak terdeteksi. Jika pasien merasa tidak sehat, maka spesialis akan meresepkan pemeriksaan tambahan. Ada kemungkinan bahwa penyakit ini berhubungan dengan penyakit paru-paru. Jenis dan metode diagnostik tambahan tergantung pada gejala dan kondisi pasien.

Bagaimana studi lendir

TBC adalah efek patologis berbahaya pada jaringan paru-paru, disintegrasi mereka diamati. Analisis dilakukan dengan beberapa metode. Yang paling umum - ELISA (immunoassay). Inti dari metode ini:

  1. Antibodi ditambahkan ke larutan di mana bagian dahak ditempatkan.
  2. Periksa konsentrasi antigen, dibandingkan dengan norma tubuh yang sehat.
  3. Tentukan aktivitas lingkungan patologis.
  4. Mendiagnosis

Versi kedua dari penelitian laboratorium adalah LIMBAH. Untuk metode mengambil peralatan medis khusus. Inti dari penelitian perangkat keras:

  1. Dalam lingkungan mikro disuntikkan dahak untuk jenis infeksi yang dimaksud.
  2. Aparat mulai tumbuh pada strain bakteri suhu tertentu.
  3. Karbon dioksida diproduksi dalam proses, dan sensor mengambilnya.
  4. Gas bergabung dengan pewarna.
  5. Pada indeks fluoresensi membuat kesimpulan tentang jenis penyakit.

Cara termudah adalah budaya. Dahak ditaburkan di lingkungan khusus. Dokter memeriksa jenis koloni formasi mikroba. Metode ini adalah yang terpanjang, tetapi memungkinkan Anda untuk membuktikan diagnosis. Ini digunakan sangat jarang, justru karena jangka waktu yang panjang, yang tidak selalu sesuai untuk pasien.

Analisis pcr sputum untuk TBC

PCR adalah singkatan dari istilah rantai reaksi polimerase medis. Diagnostik adalah salah satu perkembangan terbaru para ilmuwan. Dibuka pada tahun 1983, pentingnya penemuan dihargai di dunia, ilmuwan menerima penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Metode ini didasarkan pada penggunaan rekayasa genetika. Fleksibilitas dalam kebutuhan untuk sejumlah kecil bahan untuk diagnosis yang akurat. Identifikasi infeksi tuberkulosis benar-benar di awal infeksi, tanpa menunggu perkembangan penyakit.

Inti dari metode itu adalah polimerase:

  • seorang pasien mengambil serpihan partikel DNA;
  • melakukan sintesis bahan secara biologis;
  • ditentukan oleh kelas mikroorganisme.

Prosesnya rumit secara teknologi, itu melibatkan pemeriksaan genetika molekuler. PCR untuk TBC membutuhkan waktu beberapa jam. Waktu yang diperlukan untuk metode lain tidak dapat dibandingkan dengan dia dalam kecepatan. Setelah lulus analisis, pasien menunggu deteksi agen penyebab. Proses yang mendasari hanya spesialis yang bisa mengerti. Orang biasa tidak mengerti seluk-beluk metode ini.

Bagaimana diagnosis tes tuberkulosis:

  1. Ambil bahan yang diperlukan untuk analisis. Apa itu: darah, perut, dahak, air, dicuci dengan bronkus.
  2. Jenis bahan dipilih tergantung pada jenis infeksi yang mungkin patogen.
  3. Langkah selanjutnya adalah mempelajari koneksi rantai. Dua rantai mengalami suhu tinggi hingga 98 derajat. Tahap ini disebut denaturasi (penghancuran rantai DNA struktural). Waktu paparan suhu - hingga 2 menit.
  4. Tahap selanjutnya adalah anil. Suhu berkurang, primer diizinkan untuk terhubung ke untai DNA.
  5. Akibatnya, terjadi perpanjangan - sintesis molekul yang diperlukan untuk proses tersebut.

Untuk analisis seperti itu, peralatan khusus diperlukan. Itu mahal, jadi tidak tersedia di fasilitas perawatan kesehatan apa pun. PCR dilakukan dalam kasus-kasus sulit, ketika tidak ada hasil pasti dari metode diagnostik konvensional, tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental untuk memeriksa kondisi pasien.

Keunggulan teknologi PCR:

  1. Kecepatan mendapatkan hasilnya. Sekitar 5 jam seorang dokter memiliki data yang akurat. Kecepatan ini memungkinkan Anda untuk membantu pasien dalam keadaan darurat. Lebih sering, ini adalah periode pra operasi.
  2. Diizinkan jika metode lain tidak dapat digunakan. Sebagai contoh, pengulangan sering sinar-X mengarah pada radiasi. PCR tidak berbahaya bagi pasien.
  3. Anda dapat menjelajahi lingkungan biologis apa pun. Bahkan bentuk tuberkulosis yang kompleks pun diidentifikasi.
  4. Metode ini aman, oleh karena itu, cocok untuk anak-anak.
  5. Infeksi terdeteksi pada setiap tahap.
  6. PCR tidak memungkinkan untuk menyembunyikan sejumlah kecil formasi mikro bakteri.
  7. Cocok untuk memeriksa kemungkinan kekambuhan TBC.

Berapa banyak analisis dahak untuk TBC

Sampel diambil lebih dari satu kali. Pengulangan mengecualikan kemungkinan kesalahan atau mendapatkan bahan berkualitas buruk yang tidak mencerminkan posisi dan kondisi pasien yang sebenarnya. Berapa kali untuk mengumpulkan dahak, beri tahu dokter yang hadir. Pilihan terbaik adalah tiga kali sehari. Terkadang sampel tambahan mungkin diperlukan. Selama periode waktu yang mereka kumpulkan:

  1. Sebelum makan pagi.
  2. 3-4 jam setelah tes pertama.
  3. Di hari kedua, juga sebelum makan.

Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang dapat memengaruhi tubuh siapa pun. Ada banyak situasi infeksi. Dengan kecurigaan kemungkinan infeksi, jangan menunggu untuk gejala yang cerah. Ini harus diuji, diperiksa dan pada waktunya untuk memulai perawatan.

Diagnosis PCR TB pada anak-anak dan orang dewasa: indikasi untuk

Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mengakui 20 tahun lalu bahwa tingkat penyebaran tuberkulosis di luar kendali dan mencapai skala epidemi. Sejak itu, situasinya tidak membaik. Lebih dari satu juta kasus penyakit ini didiagnosis setiap tahun, yang hampir seperempatnya berakibat fatal. Dalam dekade terakhir, tingkat kejadian di kalangan anak-anak telah meningkat, sebagian besar bentuk penyakit ini tidak sesuai dengan terapi antibiotik standar.

Saat ini, salah satu tugas global untuk kedokteran adalah pengembangan metode diagnostik yang memungkinkan untuk mengidentifikasi patologi sebelum timbulnya gejala klinis yang nyata. Salah satunya adalah reaksi rantai polimerase (PCR) untuk TBC, yang membantu mendeteksi tongkat penyebab penyakit Koch dalam darah, dahak, dan cairan biologis lainnya.

Diagnosis TBC

Tes skrining bertujuan untuk mendeteksi pasien, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran infeksi di masyarakat. Untuk anak-anak di bawah usia 14 tahun, tes Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah tes imunologi di mana dosis tuberkulin disuntikkan secara subkutan - campuran kompleks bahan genetik dari beberapa jenis mikobakteri. Munculnya reaksi yang diucapkan menunjukkan proses infeksi yang terjadi secara aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau sinar-x. Metode ini membantu memvisualisasikan lesi patologis pada jaringan paru-paru. Namun, itu menyebabkan kesulitan dalam membedakan TB dari patologi organik lain (neoplasma ganas dan jinak, proses inflamasi, invasi parasit, kerusakan paru-paru profesional).

Untuk memperjelas struktur dan ukuran fokus patologis, studi instrumental tambahan mungkin diperlukan:

  • radiografi yang ditargetkan;
  • computed tomography;
  • pencitraan resonansi magnetik.

Metode untuk diagnosis TB

Dalam hal hasil yang meragukan dan untuk penunjukan terapi yang memadai, ada kebutuhan untuk metode diagnostik yang lebih akurat yang memungkinkan untuk mengisolasi patogen. Pemeriksaan mikroskopis dan bakteriologis dahak digunakan untuk mengkonfirmasi bentuk TB paru untuk waktu yang lama.

Dalam beberapa tahun terakhir, kejadian mikobakterium dari berbagai organ dan sistem - ginjal, tulang, usus, kulit - menjadi lebih sering. Untuk mengidentifikasi bentuk-bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasonografi, kultur urin dan feses, pemeriksaan endoskopi dapat digunakan.

Diagnosis PCR untuk TBC akan membantu mengonfirmasi keberadaan tongkat Koch dalam darah, serta sensitivitasnya terhadap obat-obatan tertentu. Ini adalah metode yang sangat efektif berdasarkan deteksi bahan genetik bakteri dalam berbagai cairan biologis.

Spesifisitas dan indikasi

Reaksi rantai polimerase adalah metode diagnostik mikrobiologis yang sangat sensitif, yang didasarkan pada prinsip-prinsip rekayasa genetika. Untuk mengkonfirmasi keberadaan patogen dalam bahan biologis, cukup untuk mendeteksi fragmen asam nukleat yang unik untuknya. PCR untuk TBC dapat mendeteksi bakteri dalam darah, dahak, urin.

Saat ini, dikembangkan beberapa metode analisis. Yang paling populer di antara mereka adalah sebagai berikut:

  • PCR waktu-nyata;
  • teknologi mikofluida;
  • sequencing dan pyrosequencing.

PCR waktu-nyata

Laboratorium paling sering menggunakan reaksi berantai polimerase waktu-nyata, karena mengurangi jumlah hasil positif palsu, dan proses analisisnya sendiri membutuhkan waktu singkat.

Mengingat sejumlah besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakefektifan metode diagnostik standar, PCR semakin banyak digunakan. Tujuan dari analisis ini ditunjukkan pada:

  • mengidentifikasi area yang mencurigakan pada X-ray;
  • hasil tes tuberkulin yang meragukan;
  • ketidakmungkinan melakukan analisis mikroskopis dan bakteriologis dahak pada orang dalam kondisi serius;
  • melakukan intervensi bedah ketika perlu untuk segera memastikan bahwa tidak ada infeksi;
  • tidak dapat diterimanya penggunaan fluorografi, x-ray atau computed tomography (misalnya, pada wanita hamil dan menyusui, dalam kasus paparan radiasi berlebih);
  • diduga TB luar paru (disarankan agar tidak hanya darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR TBC telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan anak-anak, karena kurangnya paparan tambahan dan hasil yang cepat.

Prosedur persiapan dan analisis

Persiapan khusus untuk PCR darah tidak diperlukan. Namun, untuk menghindari komplikasi pengambilan sampel darah dan untuk mendapatkan bahan berkualitas tinggi, aturan umum berikut harus diikuti:

  • analisis harus diambil di pagi hari tidak lebih awal dari 2 jam setelah bangun tidur;
  • Seharusnya membatasi asupan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum pengambilan sampel darah;
  • jangan makan, teh, dan kopi selama 8-9 jam, diperbolehkan minum air bersih;
  • Jangan merokok setidaknya 3-4 jam.

Dalam hal pengobatan permanen (hormon, antikoagulan, obat antiinflamasi, antibiotik, pengencer darah), Anda harus memberi tahu asisten laboratorium tentang hal ini.

Setelah melahirkan dahak, Anda harus menyikat gigi dengan baik dan berkumur beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam wadah steril. Untuk hasil yang lebih baik, obat ekspektoran atau mukolitik dapat dikonsumsi pada malam hari.

Diagnosis itu sendiri terdiri dari beberapa tahap.

    Bahan pagar. Itu dapat dilakukan di laboratorium dan dari jarak jauh. Beberapa jenis bahan yang dikumpulkan pasien secara independen (urin, dahak).

Penghancuran struktur asam nukleat (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan uji dipanaskan hingga suhu 98 derajat dan ditahan selama beberapa menit. Akibatnya, heliks ganda terurai, molekul beruntai tunggal terbentuk.

  • Annealing Setelah menambahkan primer (bagian pendek asam nukleat), suhu menurun beberapa derajat, polimerase diaktifkan.
  • Pengakuan. Temperatur dibawa ke tingkat optimal, aktivitas enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan sesuai dengan aturan saling melengkapi Chargaff.

    • Untuk menyelesaikan penelitian ini, perlu mensintesis jumlah molekul DNA yang diperlukan - sekitar 50 siklus reaksi di atas. Dibutuhkan sekitar 2-3 jam. Hasil positif dari reaksi tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan indikator keberadaan mikroorganisme dalam tubuh.

    Keuntungan dan kerugian dari metode ini

    Dibandingkan dengan metode mikrobiologis lainnya, PCR tidak membutuhkan waktu lama untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari pengujian.

    Keuntungan lain adalah spesifisitas tinggi dari analisis, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan patogen dengan akurasi 90-95% di hampir semua biomaterial (darah, urin, tinja, cairan serebrospinal, dahak, pembilasan bronkus).

    Namun, ada beberapa kelemahan dari metode ini:

    • persentase hasil positif palsu yang agak tinggi (hingga 15%), yang terkait dengan deteksi mikroorganisme tidak hidup;
    • dalam beberapa kasus, Anda dapat melewatkan fakta penyakit, karena Mycobacterium tuberculosis sering mengalami mutasi dan perubahan materi genetiknya;
    • efisiensi rendah dalam pemeriksaan orang dengan defisiensi imun;
    • biaya riset yang tinggi, kebutuhan akan peralatan dan reagen yang mahal.

    Apa yang bisa diganti?

    Dengan adanya berbagai bentuk infeksi tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih akurat dan pilihan pengobatan, perlu menggabungkan beberapa studi diagnostik:

      Analisis wajib untuk anak-anak adalah tes Mantoux. Jika introduksi tuberkulin (bahan genetik mikobakteri) terjadi reaksi yang nyata, dapat diasumsikan infeksi dengan basil tuberkel.

    Metode sinar-X dapat digunakan untuk memvisualisasikan fokus patologis. Dalam diagnosis TB luar paru, metode endoskopi digunakan dengan biopsi simultan:

    • bronkoskopi membantu mengidentifikasi lesi pada laring, trakea, bronkus;
    • kolonoskopi - usus;
    • sistouretroskopi - organ sistem kemih;
    • histeroskopi - alat kelamin wanita. Metode-metode ini tidak spesifik, untuk membuat diagnosis yang akurat, patogen harus diidentifikasi.

    Tes klinis umum akan membantu untuk lebih spesifik menentukan kondisi tubuh. Diperlukan hitung darah lengkap dengan formula leukosit.

    Peningkatan jumlah neutrofil dengan penurunan tingkat limfosit dan peningkatan laju sedimentasi eritrosit (ESR) menunjukkan proses inflamasi aktif dari etiologi bakteri. Untuk mengecualikan kerusakan pada organ-organ sistem kemih menggunakan urinalisis umum dan kultur untuk sterilitas.

    PCR saat ini tersedia di sebagian besar laboratorium swasta. Ini tidak hanya membutuhkan spesialis berkualifikasi tinggi, tetapi juga peralatan mahal, sejumlah besar reagen. Oleh karena itu, penggunaan metode ini terbatas meskipun akurasi dan spesifisitasnya tinggi.

    Keuntungan dan kerugian PCR (a) untuk diagnosis tuberkulosis

    Infeksi tuberkulosis spesifik telah terjadi pada jaringan dan struktur manusia selama bertahun-tahun, dan dalam keadaan tertentu menyebar cepat ke seluruh tubuh dalam 2-3 bulan. Kadang-kadang jalannya pengobatan terbaik sangat sulit untuk dipilih karena keterlambatan diagnosis dan adaptasi patogen pada banyak obat.

    Diagnosis tuberkulosis PCR terbaru membantu mendeteksi tidak hanya penyakit yang berkembang, tetapi juga patogen itu sendiri, ketika tanda-tanda pertama penyakit belum muncul.

    Apa itu PCR?

    Diagnosis TBC oleh PCR telah muncul baru-baru ini. Pada tahun 1983, seorang ahli mikrobiologi dari Amerika, Cary Mullis, menemukan prosedur dimana mikroorganisme dapat direkonstruksi dari bahan biologis dalam segmen pendek. Karya ini telah mendapatkan Hadiah Nobel.

    PCR untuk TBC adalah proses rantai polimer di mana diagnosis dan deteksi patogen virus oleh rekayasa genetika. Teknik ini digunakan di laboratorium imunologi, mikrobiologi, virologi dan biokimia.

    Metode universal membantu dokter untuk mendiagnosis dan mengidentifikasi proses infeksi bahkan setelah jam pertama infeksi, jauh sebelum timbulnya gejala. Penelitian dimungkinkan bahkan dengan sejumlah kecil biomaterial.

    Apa yang dibutuhkan untuk analisis?

    • Beberapa segmen DNA (primer), yang dengannya sintesis biologis dimulai;
    • Senyawa nukleotida, dasar molekul DNA atau RNA;
    • Enzim polimerase yang mempercepat analisis PCR.

    Apa dasar dari metode ini?

    Pertama, suatu segmen DNA diekstraksi dari biomaterial dari orang yang terinfeksi, menggunakan metode biosintesis gen-molekuler, jenis mikroorganisme yang menjadi milik biofragmen ditentukan lebih lanjut.

    Reaksi kompleks ini membutuhkan waktu lebih sedikit daripada beberapa biometode. PCR menentukan patogen dalam beberapa jam, sementara tidak perlu mengisolasinya dari cairan biologis (dahak, serebrospinal atau media darah), tidak perlu untuk menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi. Sudah cukup bahwa bahan yang diteliti mengandung untai DNA dari patogen infeksius.

    Ketika melakukan tes darah PCR untuk TBC secara in vitro, sintesis asam ribonukleat dari mycobacterium tuberculosis dibuat secara artifisial.

    Tahapan diagnosis

    Reaksi molekuler oleh PCR adalah prosedur sederhana yang membutuhkan sedikit waktu. Biomaterial yang diperlukan diambil: darah, dahak, cairan pencuci bronkial digunakan untuk menentukan tbc.

    1. Pertama, bentuk utama DNA dihancurkan, 2 rantai dipisahkan pada suhu tinggi (maksimum 98 ° C tidak lebih dari 2 menit);
    2. Kemudian dilakukan anil, suhu primer dikurangi beberapa divisi, untai DNA terhubung ke primer;
    3. Tahap selanjutnya disebut elongasi, dengan biosintesis dari struktur molekul yang diperlukan.

    Untuk mendapatkan jumlah salinan DNA yang diperlukan, dari 25 hingga 30 siklus seperti itu harus lewat, dan jumlah mikobakteri yang dihasilkan mudah dikenali.

    Apakah perlu melakukan PCR untuk TBC?

    Langsung ke semua pasien dengan dugaan TVC, diagnostik rantai tidak dilakukan, karena prosedur membutuhkan penggunaan peralatan yang mahal. Tidak semua institusi medis mengizinkannya untuk dibeli, terutama karena metode diagnosa mycobacterium tuberculosis yang biasa juga bersifat informatif.

    • Pengambilan riwayat dengan cermat, menanyai pasien;
    • Pemeriksaan eksternal;
    • Tes tuberkulin Mantoux;
    • Pemeriksaan radiografi atau fluorografi;
    • Jika perlu, diagnostik komputer;
    • Pemeriksaan mikroskopis atau bakteriologis dari topeng dengan dahak.

    PCR untuk TBC dilakukan hanya ketika tidak memungkinkan untuk melakukan analisis instrumental lain atau dalam keadaan yang sulit untuk didiagnosis.

    Terlepas dari kenyataan bahwa sejumlah besar metode diagnostik telah ditemukan, jumlah pasien dengan TB terus bertambah. Selain itu, kejadian tersebut telah memperoleh beberapa fitur: bentuk parah dari penyakit ini sering diamati, jumlah kematian meningkat, patogen menjadi resisten terhadap obat kemoterapi yang ada.

    Banyak orang tidak ingin menjalani pemeriksaan rutin setiap tahun, menolak vaksinasi, yang mengarah pada peningkatan kejadian. Keadaan seperti itu membutuhkan metode penelitian yang efektif dan informatif yang tersedia untuk orang dewasa dan anak-anak yang didiagnosis dengan tbc. PCR memiliki keunggulan dibandingkan metode diagnostik lainnya.

    Apa nilai metode ini?

    Penelitian terbaru ini telah membuktikan dirinya dengan baik. Jika karena sejumlah alasan sulit untuk membuat diagnosis atau, dalam beberapa kasus kontroversial, PCR mendeteksi basil tuberkel lebih mudah dalam bahan biologis daripada metode lain.

    • Penelitian cepat ini, segmen kecil molekul memungkinkan untuk membuat diagnosis yang akurat dalam waktu singkat dalam waktu sekitar 5 jam, ini digunakan dalam kasus darurat, misalnya, sebelum intervensi bedah yang mendesak;
    • Tes darah untuk TBC dimungkinkan ketika metode lain tidak tersedia atau kontraindikasi - kadang-kadang untuk mendeteksi patogen tbc, banyak Rg-shot harus diambil, dosis radiasi terlalu besar;
    • Menggunakan reaksi polimerase, cairan biologis apa pun dapat diperiksa keberadaan mikobakteri. Misalnya, Anda dapat melakukan studi tentang cairan serebrospinal dengan meningitis tuberkulosis atau urin dengan tuberkulosis urogenital;
    • Metode ini aman, diagnosis TBC pada anak-anak menggunakan PCR tidak menyebabkan kesulitan;
    • Metode reaksi polimer menunjukkan basil tuberkel dalam bentuk dan tahapan penyakit apa pun;
    • Kehadiran hanya beberapa bakteri dalam biomaterial memungkinkan Anda untuk melihat keberadaan mikroorganisme, karena ini adalah reaksi sensitif;
    • PCR dengan mudah mendiagnosis kambuhnya penyakit.

    Terlepas dari sejumlah besar keuntungan, semua pasien dengan dugaan studi tbc tidak dilakukan, karena ada juga kelemahannya, mereka juga diperhitungkan.

    Video

    Video - diagnosis dini

    Apa kerugiannya?

    Metode diagnosis ini agak luar biasa daripada yang alami, karena ini ada alasan. Pertama-tama, tingginya biaya metode diperhitungkan. Peralatan itu mahal, klinik umum tidak memiliki kesempatan untuk membelinya karena harganya yang tinggi, tetapi sebagian besar laboratorium yang dibayar memiliki peralatan itu, mereka dianalisis.

    • Metode ini mendeteksi bakteri mati yang telah mati setelah perawatan, sementara PCR menunjukkan hasil positif. Segera setelah kemoterapi, tidak masuk akal untuk melakukan penelitian, karena hasilnya tidak dapat diandalkan;
    • Mutasi Mycobacterium tuberculosis rentan, yang mengarah pada inefisiensi metode, dan untai DNA tidak dapat disintesis secara konsisten.

    Lingkungan untuk penelitian harus dipilih dengan hati-hati, darah atau urin hanya dapat dikumpulkan jika ada kecurigaan infeksi. Sputum tidak boleh diambil untuk pemeriksaan jika diduga TB tulang. Dalam situasi ini, diagnosa akan salah.

    Darah dan urin dari seorang pasien dengan tuberculosis untuk dipelajari pada PCR jarang diambil, identifikasi penyakit dengan cara ini dipertanyakan. Dalam media biologis ini, patogen ditentukan hanya pada sepsis, atau dalam kasus TB yang disebarluaskan. Bentuk lokal paling umum, dengan darah dan urin mereka tetap tidak berubah. Paling sering, dahak diambil untuk pemeriksaan.

    Siapa yang menunjukkan analisisnya?

    Sebagian besar pasien dikirim untuk diagnosis PCR dalam kasus TB yang kontroversial dan sulit. Kapan profesional medis mengeluarkan rujukan untuk penelitian?

    1. Jika ada kontak dengan seseorang yang telah didiagnosis dengan tuberkulosis dengan andal, tetapi sulit untuk didiagnosis menggunakan metode konvensional;
    2. Dalam keadaan itu, jika pasien menyediakan klinik tidak mungkin dilakukan radiografi atau penelitian lain. Dalam situasi seperti itu, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan metode polimer. Analisis dahak dikirim ke laboratorium dalam wadah khusus, dan hasilnya baru diketahui setelah beberapa jam;
    3. Sebelum operasi, sangat penting untuk menentukan apakah pasien sakit dengan TBC, dalam hal ini PCR diindikasikan;
    4. Karena keamanan metode ini, dimungkinkan untuk melakukan survei terhadap wanita hamil atau anak-anak, tanpa membuat beban x-ray tambahan;
    5. Hasil tes Mantoux Diragukan.

    Siapa pun yang ingin dapat menjalani pemeriksaan untuk biaya, jika TBC belum dikonfirmasi dengan bantuan bakteriologi dan fluoroskopi. Ini terjadi jika lesi di jaringan paru-paru tidak terlihat dalam gambar Rg dalam proyeksi langsung, dan pasien tidak dapat mengumpulkan dahak dengan benar, tetapi tanda-tanda tuberkulosis manusia terganggu.

    Reaksi PCR modern untuk diagnosis adalah kunci keberhasilan pengobatan, akibatnya prevalensi penyakit menurun. Metode tradisional untuk mengidentifikasi penyakit tidak selalu menghasilkan efek yang diinginkan.

    Jadi analisis PCR sampai saat ini telah menjadi salah satu metode diagnosis yang dapat diandalkan dan aman pada tahap awal penyakit.

    Artikel Lain Tentang Laringitis