Apa itu analisis PCR untuk TBC

Metode inovatif untuk mendeteksi mikroorganisme, ditemukan oleh ilmuwan Cary Mullis pada akhir abad terakhir - analisis PCR. Dia menerima Hadiah Nobel untuk tulisannya. Sepenuhnya proses ini disebut reaksi berantai polimerase. Ini terdiri dalam pemulihan jenis mikroorganisme dalam biomaterial yang disediakan menggunakan fragmen DNA pendek. Ini memungkinkan Anda untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal dan memulai perawatan segera, tanpa mengarah pada gejala dan komplikasi serius.

Apa analisisnya?

Diagnosis oleh PCR adalah untuk mendapatkan segmen DNA patogen dari bahan biologis dan menyelaraskannya dalam rantai yang benar. Ini memungkinkan identifikasi mikroorganisme tempat sel berada.

Prosedur ini dilakukan dalam tiga tahap:

1. Koleksi bahan biologis.
2. Identifikasi dan penyelarasan DNA.
3. Pengakuan infeksi.

Penelitian ini membutuhkan peralatan medis khusus - amplifikasi. Itu dilengkapi dengan kamera, di mana bahan yang dipelajari berinteraksi dengan suhu tinggi dan enzim kimia. Di pintu keluar, teknisi laboratorium memiliki rantai DNA panjang dari agen penyebab penyakit, jika ada satu di tubuh manusia.

Cara mempersiapkan diagnosis

Analisis PCR adalah proses rekayasa genetika yang kompleks yang membutuhkan akurasi dan keseriusan dari teknisi laboratorium dan pasien. Peran besar dalam kebenaran hasil analisis dimainkan oleh persiapan untuk prosedur, yaitu, pengumpulan bahan yang benar.

Sumber utama informasi tentang penyakit ini adalah:

Pilihan lain dapat digunakan, cairan, jika perlu, diambil untuk analisis dari berbagai organ.

Untuk pasien, ada aturan tertentu yang harus diikuti sebelum prosedur. Jika ada tes darah, dilarang selama 8 jam sebelum pengambilan:

• makan makanan;
• untuk merokok;
• minum minuman beralkohol;
• minum obat di dalam.

Di malam hari, sebelum mengumpulkan dahak, obat diminum untuk mengencerkannya dan memfasilitasi ekspektasi. Di pagi hari, kumpulkan bahan setelah membersihkan rongga mulut.

Urin dikumpulkan dalam botol steril di pagi hari dengan perut kosong, setelah dicuci, sebelum minum obat apa pun.

Jika seseorang menggunakan antibiotik, maka analisis reaksi berantai polimerase harus ditunda, jika tidak, hasil PCR tidak dapat diandalkan. Dahak atau darah harus disumbangkan dua minggu setelah akhir pengobatan.

Bagaimana proses mengidentifikasi bakteri

Secara singkat, prosesnya adalah mengisolasi sebagian dari DNA. Penggunaan metode modern rekayasa genetika memungkinkan kita untuk menentukan jenis mikroorganisme. Selain itu, bahan untuk analisis perlu sedikit.

Secara teknis, ini adalah prosedur yang sangat rumit, tetapi membutuhkan waktu lebih sedikit daripada studi bakteriologis klasik. Patogen tidak perlu diisolasi dari biomaterial, tidak perlu tumbuh selama beberapa minggu. Pada hari pengiriman, pasien sudah dapat mengetahui hasil analisisnya.

Seluruh proses PCR berlangsung secara bertahap:

1. Pekerjaan sedang berlangsung dengan bentuk utama DNA, yang pada suhu tinggi, mendekati 100 derajat, dibagi menjadi dua rantai.
2. Suhu menurun, benang terhubung ke fragmen asam nukleat - primer.
3. Terjadi perpanjangan - sintesis struktur molekul.

Seluruh sesi terdiri dari sekitar tiga puluh prosedur seperti itu, mengulangi siklus sebagai reaksi berantai. Ini diperlukan untuk membuat jumlah sel di mana bakteri yang dihasilkan menjadi dikenali.

Kesimpulan penelitian

Deskripsi hasil PCR (reaksi berantai polimerase) memberi dokter TB, sederhana atau digunakan. Dalam kasus pertama, deskripsi hanya akan berisi informasi tentang ada atau tidaknya tongkat Koch. Jika penguraiannya terinci, dari situ Anda bisa mengetahui sejauh mana penyakit itu, fokusnya. Menurut kriteria ini, adalah mungkin untuk menentukan pengobatan yang paling tepat untuk TBC di setiap kasus.

Analisis polimerase dari reaksi berantai tidak membedakan antara patogen hidup dan mati, dan hanya berbicara tentang keberadaannya. Oleh karena itu, masuk akal untuk lulus tes kedua untuk tuberkulosis hanya 3-4 minggu setelah terapi yang ditentukan oleh dokter.

Jika hasilnya positif, tulisan "Mycobacterium tuberculosis" dimasukkan pada kesimpulan. Jika ada hasil negatif, di sebelah nama biologis bakteri ada tanda "tidak terdeteksi." Analisis mungkin positif palsu. Ini jarang terjadi - dalam kasus pelanggaran teknik melakukan studi PCR atau di hadapan mikroorganisme yang tidak dapat hidup. Kesimpulan akhir tentang penyakit ini hanya dapat dibuat oleh dokter TB.

Keuntungan dari metode ini

Diagnosis PCR tuberkulosis telah mendapatkan popularitas karena berbagai alasan. Ini memiliki banyak keuntungan, termasuk:

1. Akurasi penelitian. Saat menganalisis teknologi, dimungkinkan untuk mengidentifikasi bakteri, meskipun mereka hadir dalam jumlah kecil.
2. Hasil cepat. Seluruh proses dari mengumpulkan materi hingga kesimpulan selesai membutuhkan waktu sekitar 5 jam. Jika dibandingkan dengan menabur, ia harus menunggu hingga beberapa minggu.
3. Keamanan penuh untuk orang tersebut, tidak seperti fluorografi dengan radiasinya.
4. Biomaterial cair apa pun digunakan. Untuk PCR pada TB paru, dahak memberikan informasi yang paling akurat, pada meningitis tuberkulosis, sampel diambil dari sumsum tulang belakang. Tes darah membantu mengidentifikasi fokus infeksi lokal.
5. Kepekaan bakteri terhadap antibiotik diuji. Ini memungkinkan Anda meresepkan perawatan yang benar.
6. Diagnosis dini. Anda dapat belajar tentang keberadaan penyakit sebelum timbulnya gejalanya.

Selain aspek positif, ada juga kelemahannya. Yang utama adalah harga. Analisis PCR tidak murah, yang terkait dengan penggunaan peralatan mahal. Kerugian lain adalah kebutuhan untuk menunggu waktu untuk tes ulang setelah pengobatan TB. Terkadang hasil tes positif palsu. Ini terjadi karena mutasi bakteri.

Saat PCR dibutuhkan

PCR untuk TB paru tidak memiliki kontraindikasi dan benar-benar aman. Karena itu, ada situasi dan penyakit tertentu saat ini adalah satu-satunya kemungkinan penelitian.

Ini termasuk:

• kehamilan;
• kontak dengan pasien TB;
• kesulitan dalam menentukan diagnosis penyakit paru;
• pemeriksaan sebelum operasi;
• reaksi alergi;
• Infeksi HIV;
• usia muda.

Anda dapat menggunakan metode PCR ke arah yang dikeluarkan dalam phthisiology, serta dokter anak, dokter atau paru-paru.

Apa yang bisa menggantikan diagnosis PCR tuberkulosis

Jenis survei lain tidak menjadi usang, tetapi terus digunakan. Mereka digunakan dalam kasus-kasus di mana tidak mungkin untuk melakukan PCR untuk TBC. Selain itu, metode modern tidak ideal, terkadang indikatornya dipertanyakan dan perlu diperiksa ulang.

Metode berikut membantu menentukan keberadaan tuberkulosis pada seseorang:

• diagnosis tuberkulin (Mantoux);
• fluorografi;
• pengujian bahan biologis untuk flora;
• rontgen paru-paru.

Studi-studi ini gratis dan tersedia untuk semua orang. Tetapi mereka memiliki kekurangan:

• Tes TBC menyebabkan alergi. Kontraindikasi pada penyakit kulit.
• Studi X-ray disertai dengan radiasi, yang tidak berlaku untuk anak-anak, orang dengan defisiensi imun dan wanita hamil.
• Analisis bakteriologis membutuhkan waktu lebih lama, hasilnya dapat menunggu hingga satu bulan.

Alternatif bukan jaminan kesimpulan yang benar seratus persen. Mereka paling sering digunakan untuk tujuan pencegahan. Diagnosis TBC oleh PCR memberikan informasi yang paling dapat diandalkan. Jika memungkinkan, lebih baik menggunakannya.

Keunikan TBC pada anak-anak dan kebutuhan akan PCR

Anak harus dilindungi dari penyakit ini - infeksi TBC dapat menyebabkan kerusakan serius pada tubuh dengan kekebalan yang belum terbentuk sepenuhnya.

Setelah memasukkan tongkat Koch ke dalam organisme anak-anak, perkembangan penyakit melewati tahap-tahap berikut:

• Laten. Itu berlangsung hingga satu tahun, tanpa menunjukkan gejala apa pun.
• Keracunan. Mempengaruhi kesehatan secara keseluruhan. Muncul kelemahan, apatis, kurang nafsu makan, kantuk dan penurunan kinerja. Temperatur sedikit meningkat secara konstan.
• Bentuk utama dari penyakit ini. Tuberkulosis terlokalisasi, membentuk fokus penyakit. Anak menderita batuk, sesak napas, sakit kepala, pembengkakan kelenjar getah bening.
• Tuberkular bronkoadenitis. Gejalanya adalah nyeri pada tulang belikat, batuk dengan nada suara yang berbeda, mengi.

Biasanya, tuberkulin disuntikkan untuk mengidentifikasi infeksi di bawah kulit anak. Jika jenis pemeriksaan ini merupakan kontraindikasi, maka PCR untuk TBC adalah pilihan yang sangat diperlukan untuk diagnosis. Anak-anak biasanya melakukan tes darah, tetapi dahak dikumpulkan jika perlu. Pada kecurigaan sedikit pun dari keberadaan TBC, penelitian tambahan dilakukan untuk memastikan hasil positif dan segera memulai pengobatan pada tahap awal, mencegah perkembangan penyakit.

Metode penelitian modern selalu lebih cepat dan lebih dapat diandalkan. Sangat disayangkan bahwa karena peralatan mahal untuk melakukan tes seperti itu ada kemungkinan tidak di semua lembaga medis dan daerah. Cara melakukan pemeriksaan biasanya dipilih oleh dokter, tetapi pasien memiliki hak untuk memilih. Jika Anda harus mengikuti tes PCR, beri tahu kami tentang hal itu di komentar. Jika artikel itu bermanfaat bagi Anda, bagikan di jejaring sosial - mungkin itu akan membantu teman Anda.

Apa PCR untuk TBC dan bagaimana melakukan tes?

PCR untuk TBC diresepkan ketika tidak mungkin untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan penelitian lain. Analisis memungkinkan untuk mengidentifikasi tongkat Koch pada tahap paling awal dan memulai perawatan tepat waktu.

Deskripsi PCR untuk TBC

Indikasi untuk diagnostik PCR

Jenis PCR untuk TBC

Persiapan untuk analisis

Bagaimana PCR untuk TBC?

Interpretasi hasil survei

Keunikan PCR untuk TBC pada anak-anak

Berapa biaya PCR untuk TBC?

Komentar dan Ulasan

Deskripsi PCR untuk TBC

PCR (reaksi berantai polimerase) untuk tuberkulosis adalah analisis akurat yang dapat mendeteksi tongkat Koch dalam beberapa jam. Diagnostik didasarkan pada metode rekayasa genetika. Dokter mengisolasi sel DNA, menggunakan tes gen-molekuler untuk menentukan jenis patogen.

Keuntungan dari metode ini

• memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi patogen pada tahap awal, tanpa manifestasi dari gejala yang terlihat;
• diagnostik tidak memiliki kontraindikasi dan diizinkan untuk anak-anak;
• penelitian dapat dilakukan untuk mengambil jumlah minimum materi.
• universalitas penelitian biomaterial;
• Penelitian ini efektif dalam menentukan kekambuhan penyakit.

Kekurangan dari metode ini

Seiring dengan kelebihannya, studi PCR juga memiliki kekurangan.

Yang utama adalah:

1. Ruang belajar tidak ada di mana pun Anda bisa lulus. Karena peralatan untuk diagnosis semacam itu mahal, ia dipasang di laboratorium berbayar.
2. PCR untuk TBC dapat memberikan respons positif jika mendeteksi mycobacteria yang mati, misalnya, setelah perawatan.
3. Mutasi patogen secara signifikan mengurangi efektivitas metode PCR, karena untai DNA tidak mampu mensintesis secara berurutan.
4. Kebutuhan untuk hati-hati memilih biomaterial untuk dianalisis.

Indikasi untuk diagnostik PCR

Kirim ke survei untuk indikasi berikut:

1. Jika ada setidaknya satu kontak dengan pasien dengan TB dan sulit untuk mengidentifikasi penyakit menggunakan tes standar.
2. Ada beberapa situasi ketika tidak mungkin membawa seseorang untuk rontgen atau studi lain. Dalam kasus seperti itu, jauh lebih mudah untuk mengeluarkan dahak.
3. Analisis diangkat pada malam operasi yang akan datang, ketika perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit atau tidak.
4. Jika pasien memiliki hasil yang meragukan dari reaksi Mantoux.
5. Menugaskan wanita hamil dan anak-anak untuk menghindari paparan sinar-X.

Jenis PCR untuk TBC

Pilihan biomaterial untuk skrining untuk TB harus ditunjuk secara individual.

Untuk diagnosis PCR untuk TBC dapat mengambil tes:

Tes darah

Fitur tes darah untuk TBC:

1. Dilakukan dalam kasus-kasus di mana diagnostik lain tidak cocok atau dikontraindikasikan. Misalnya, untuk membuat diagnosis yang benar, Anda perlu mengambil lebih dari satu gambar sinar-X. Paparan berlebih tidak aman bagi tubuh, sehingga jauh lebih mudah untuk mengambil darah dari pasien.
2. Juga, dokter dapat memberikan arahan kepada darah ketika menerima hasil yang kontroversial setelah fluorografi.

Analisis air liur

1. Analisis air liur kurang populer dan informatif daripada penelitian lain, karena TBC tidak mempengaruhi kelenjar ludah. Karena itu, dalam banyak kasus, hasilnya akan negatif.
2. Metode ini bertujuan untuk mengidentifikasi bentuk paru dan ekstrapulmoner.
3. Jika warna sampel tidak berubah di bawah aksi reagen, ini berarti tidak ada patogen. Namun, jika kecurigaan suatu penyakit muncul, maka dilakukan analisis kompleks tambahan.

Analisis dahak

Analisis dahak adalah yang paling informatif untuk mendeteksi patogen tuberkulosis. Sampel diambil beberapa kali, sebagai aturan, tiga kali sudah cukup. Ini menghilangkan kemungkinan kesalahan dalam mendapatkan bahan berkualitas buruk.

Jika seseorang terinfeksi TBC, dahak dalam jumlah kecil akan dilepaskan bersamaan dengan batuk. Pada pasien dalam stadium lanjut penyakit, lendir akan diekskresikan dengan bercak berdarah.

Tidak dianjurkan untuk mengambil dahak untuk pemeriksaan jika pasien memiliki kecurigaan tuberkulosis tulang atau sistem saraf.

Analisis urin

Urinalisis adalah salah satu cara untuk mendeteksi bentuk penyakit luar paru: TBC ginjal dan sistem kemih.

Dalam kasus bentuk paru penyakit, analisis umum urin praktis tidak informatif, karena tidak ada perubahan patologis yang nyata yang diamati.

Dari video Anda akan menemukan dokter mana yang membuat diagnosis TBC. Difilmkan oleh saluran TBC. ru.

Persiapan untuk analisis

Saat melakukan tes darah, PCR harus mengikuti beberapa aturan untuk mendapatkan hasil yang andal:

• Dianjurkan untuk melakukan analisis pada perut kosong;
• harus mengecualikan alkohol pada malam survei;
• Anda harus selesai minum antibiotik 15-20 hari sebelum analisis;
• Disarankan untuk tidak merokok selama satu jam sebelum pengumpulan darah.

Saat mengambil dahak untuk pemeriksaan, Anda juga disarankan untuk mengikuti beberapa aturan:

• bahan dikumpulkan di pagi hari, oleh karena itu, mereka menyikat gigi dan benar-benar membilas rongga mulut;
• jika dahak tidak bergerak dengan baik, disarankan untuk mengambil ekspektoran di malam hari atau menarik napas;
• Penting untuk berhenti minum antibiotik 15 hari sebelum pemeriksaan.

Untuk mendapatkan hasil analisis urin yang dapat diandalkan, pasien disarankan untuk mematuhi aturan berikut:

• bahan harus dikumpulkan di pagi hari;
• pada malam hari, tidak disarankan untuk makan makanan yang dapat mengubah warna cairan (bit, blueberry dan lainnya);
• Berhenti minum antibiotik selama 15 hari sebelum pemeriksaan.

Bagaimana PCR untuk TBC?

Fitur asupan bahan:

1. Tes darah diambil dari pasien di pagi hari dari vena di laboratorium.
2. Untuk pengiriman dahak pada lendir, perlu dari laring, dan lebih disukai tanpa jumlah air liur yang besar. Pasiennya harus meludah ke wadah steril khusus, kemudian menyerahkannya ke ruang kerja.
3. Dokter mengambil kerokan dengan alat khusus dari mukosa pipi.
4. Air seni disewa dalam wadah khusus. Ambil bagian tengah porsi pagi.

Reaksi genetik molekuler oleh PCR dilakukan menggunakan perangkat khusus yang disebut amplificator. Untuk mempelajari segmen DNA yang diperlukan, yang memulai sintesis molekul.

Teknik ini terdiri dari empat tahap:

1. Awalnya, biomaterial yang dibutuhkan dikumpulkan untuk penelitian (darah, dahak dan air liur).
2. Kemudian sampel dipanaskan pada suhu hingga 98 derajat dan tidak lebih dari dua menit. Dengan demikian, bentuk utama genetika DNA dihancurkan dan dua rantai terbentuk.
3. Berikutnya adalah anil atau penurunan suhu, yang menyebabkan primer mengikat untai DNA.
4. Tahap terakhir disebut elongasi. Ini adalah sintesis molekul, yang mengarah pada hasil akhir.

Anda perlu menghabiskan 25-30 siklus seperti itu untuk mendapatkan jumlah salinan DNA virus tertentu. Agen penyebab penyakit ditentukan oleh mereka.

Konten informasi dan keandalan diagnosa PCR adalah 100%.

Interpretasi hasil survei

Waktu produksi analisis adalah sekitar 5-6 jam.

Diagnostik dengan metode PCR memberikan 2 varian hasil:

1. Terdeteksi Dalam materi yang diselidiki, DNA dari agen TB terdeteksi. Probabilitas infeksi adalah 97%. Pasien tersebut dengan cepat dikirim ke apotik TB, di mana pengobatan akan dilakukan.
2. Tidak terdeteksi Respons negatif menunjukkan tidak adanya agen penyebab.

Jika hasilnya positif, dokter akan melakukan decoding secara terperinci, yang menentukan tahap dan fokus penyakit.

Galeri Foto

Keunikan PCR untuk TBC pada anak-anak

PCR diresepkan jika hasil tes Mantoux tidak pasti atau dicurigai infeksi. Memberikan prosedur ini aman untuk anak-anak.

Diagnosis PCR TB pada anak-anak dan orang dewasa: indikasi untuk

Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) mengakui 20 tahun lalu bahwa tingkat penyebaran tuberkulosis di luar kendali dan mencapai skala epidemi. Sejak itu, situasinya tidak membaik. Lebih dari satu juta kasus penyakit ini didiagnosis setiap tahun, yang hampir seperempatnya berakibat fatal. Dalam dekade terakhir, tingkat kejadian di kalangan anak-anak telah meningkat, sebagian besar bentuk penyakit ini tidak sesuai dengan terapi antibiotik standar.

Saat ini, salah satu tugas global untuk kedokteran adalah pengembangan metode diagnostik yang memungkinkan untuk mengidentifikasi patologi sebelum timbulnya gejala klinis yang nyata. Salah satunya adalah reaksi rantai polimerase (PCR) untuk TBC, yang membantu mendeteksi tongkat penyebab penyakit Koch dalam darah, dahak, dan cairan biologis lainnya.

Diagnosis TBC

Tes skrining bertujuan untuk mendeteksi pasien, pembawa tuberkulosis dan mencegah penyebaran infeksi di masyarakat. Untuk anak-anak di bawah usia 14 tahun, tes Mantoux digunakan secara besar-besaran. Ini adalah tes imunologi di mana dosis tuberkulin disuntikkan secara subkutan - campuran kompleks bahan genetik dari beberapa jenis mikobakteri. Munculnya reaksi yang diucapkan menunjukkan proses infeksi yang terjadi secara aktif.

Untuk pemeriksaan pencegahan pada orang dewasa menggunakan fluorografi atau sinar-x. Metode ini membantu memvisualisasikan lesi patologis pada jaringan paru-paru. Namun, itu menyebabkan kesulitan dalam membedakan TB dari patologi organik lain (neoplasma ganas dan jinak, proses inflamasi, invasi parasit, kerusakan paru-paru profesional).

Untuk memperjelas struktur dan ukuran fokus patologis, studi instrumental tambahan mungkin diperlukan:

• radiografi yang ditargetkan;
• computed tomography;
• pencitraan resonansi magnetik.

Metode untuk diagnosis TB

Dalam hal hasil yang meragukan dan untuk penunjukan terapi yang memadai, ada kebutuhan untuk metode diagnostik yang lebih akurat yang memungkinkan untuk mengisolasi patogen. Pemeriksaan mikroskopis dan bakteriologis dahak digunakan untuk mengkonfirmasi bentuk TB paru untuk waktu yang lama.

Dalam beberapa tahun terakhir, kejadian mikobakterium dari berbagai organ dan sistem - ginjal, tulang, usus, kulit - menjadi lebih sering. Untuk mengidentifikasi bentuk-bentuk tuberkulosis, pemeriksaan ultrasonografi, kultur urin dan feses, pemeriksaan endoskopi dapat digunakan.

Diagnosis PCR untuk TBC akan membantu mengonfirmasi keberadaan tongkat Koch dalam darah, serta sensitivitasnya terhadap obat-obatan tertentu. Ini adalah metode yang sangat efektif berdasarkan deteksi bahan genetik bakteri dalam berbagai cairan biologis.

Spesifisitas dan indikasi

Reaksi rantai polimerase adalah metode diagnostik mikrobiologis yang sangat sensitif, yang didasarkan pada prinsip-prinsip rekayasa genetika. Untuk mengkonfirmasi keberadaan patogen dalam bahan biologis, cukup untuk mendeteksi fragmen asam nukleat yang unik untuknya. PCR untuk TBC dapat mendeteksi bakteri dalam darah, dahak, urin.

Saat ini, dikembangkan beberapa metode analisis. Yang paling populer di antara mereka adalah sebagai berikut:

• PCR waktu-nyata;
• teknologi mikofluida;
• sequencing dan pyrosequencing.

PCR waktu-nyata

Laboratorium paling sering menggunakan reaksi berantai polimerase waktu-nyata, karena mengurangi jumlah hasil positif palsu, dan proses analisisnya sendiri membutuhkan waktu singkat.

Mengingat sejumlah besar bentuk tersembunyi penyakit dan ketidakefektifan metode diagnostik standar, PCR semakin banyak digunakan. Tujuan dari analisis ini ditunjukkan pada:

• mengidentifikasi area yang mencurigakan pada X-ray;
• hasil tes tuberkulin yang meragukan;
• ketidakmungkinan melakukan analisis mikroskopis dan bakteriologis dahak pada orang dalam kondisi serius;
• melakukan intervensi bedah ketika perlu untuk segera memastikan bahwa tidak ada infeksi;
• tidak dapat diterimanya penggunaan fluorografi, x-ray atau computed tomography (misalnya, pada wanita hamil dan menyusui, dalam kasus paparan radiasi berlebih);
• diduga TB luar paru (disarankan agar tidak hanya darah tetapi juga dahak digunakan).

Diagnosis PCR TBC telah membuktikan dirinya dalam pemeriksaan anak-anak, karena kurangnya paparan tambahan dan hasil yang cepat.

Prosedur persiapan dan analisis

Persiapan khusus untuk PCR darah tidak diperlukan. Namun, untuk menghindari komplikasi pengambilan sampel darah dan untuk mendapatkan bahan berkualitas tinggi, aturan umum berikut harus diikuti:

• analisis harus diambil di pagi hari tidak lebih awal dari 2 jam setelah bangun tidur;
• Seharusnya membatasi asupan makanan berlemak dan goreng sehari sebelum pengambilan sampel darah;
• jangan makan, teh, dan kopi selama 8-9 jam, diperbolehkan minum air bersih;
• Jangan merokok setidaknya 3-4 jam.

Dalam hal pengobatan permanen (hormon, antikoagulan, obat antiinflamasi, antibiotik, pengencer darah), Anda harus memberi tahu asisten laboratorium tentang hal ini.

Setelah melahirkan dahak, Anda harus menyikat gigi dengan baik dan berkumur beberapa kali. Kumpulkan bahan dalam wadah steril. Untuk hasil yang lebih baik, obat ekspektoran atau mukolitik dapat dikonsumsi pada malam hari.

Diagnosis itu sendiri terdiri dari beberapa tahap.

Bahan pagar. Itu dapat dilakukan di laboratorium dan dari jarak jauh. Beberapa jenis bahan yang dikumpulkan pasien secara independen (urin, dahak).

Penghancuran struktur asam nukleat (denaturasi molekul DNA dan RNA). Untuk melakukan ini, bahan uji dipanaskan hingga suhu 98 derajat dan ditahan selama beberapa menit. Akibatnya, heliks ganda terurai, molekul beruntai tunggal terbentuk.

Annealing Setelah menambahkan primer (bagian pendek asam nukleat), suhu menurun beberapa derajat, polimerase diaktifkan.

Pengakuan. Temperatur dibawa ke tingkat optimal, aktivitas enzim mencapai maksimum dan rantai kedua diselesaikan sesuai dengan aturan saling melengkapi Chargaff.

Untuk menyelesaikan penelitian ini, perlu mensintesis jumlah molekul DNA yang diperlukan - sekitar 50 siklus reaksi di atas. Dibutuhkan sekitar 2-3 jam. Hasil positif dari reaksi tidak selalu menunjukkan tahap aktif penyakit, tetapi merupakan indikator keberadaan mikroorganisme dalam tubuh.

Keuntungan dan kerugian dari metode ini

Dibandingkan dengan metode mikrobiologis lainnya, PCR tidak membutuhkan waktu lama untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR, hasilnya dapat diperoleh pada hari pengujian.

Keuntungan lain adalah spesifisitas tinggi dari analisis, yang memungkinkan untuk mendeteksi keberadaan patogen dengan akurasi 90-95% di hampir semua biomaterial (darah, urin, tinja, cairan serebrospinal, dahak, pembilasan bronkus).

Namun, ada beberapa kelemahan dari metode ini:

• persentase hasil positif palsu yang agak tinggi (hingga 15%), yang terkait dengan deteksi mikroorganisme tidak hidup;
• dalam beberapa kasus, Anda dapat melewatkan fakta penyakit, karena Mycobacterium tuberculosis sering mengalami mutasi dan perubahan materi genetiknya;
• efisiensi rendah dalam pemeriksaan orang dengan defisiensi imun;
• biaya riset yang tinggi, kebutuhan akan peralatan dan reagen yang mahal.

Apa yang bisa diganti?

Dengan adanya berbagai bentuk infeksi tuberkulosis, untuk diagnosis yang lebih akurat dan pilihan pengobatan, perlu menggabungkan beberapa studi diagnostik:

Analisis wajib untuk anak-anak adalah tes Mantoux. Jika introduksi tuberkulin (bahan genetik mikobakteri) terjadi reaksi yang nyata, dapat diasumsikan infeksi dengan basil tuberkel.

Metode sinar-X dapat digunakan untuk memvisualisasikan fokus patologis. Dalam diagnosis TB luar paru, metode endoskopi digunakan dengan biopsi simultan:

• bronkoskopi membantu mengidentifikasi lesi pada laring, trakea, bronkus;
• kolonoskopi - usus;
• sistouretroskopi - organ sistem kemih;
• histeroskopi - alat kelamin wanita. Metode-metode ini tidak spesifik, untuk membuat diagnosis yang akurat, patogen harus diidentifikasi.

Tes klinis umum akan membantu untuk lebih spesifik menentukan kondisi tubuh. Diperlukan hitung darah lengkap dengan formula leukosit.

Peningkatan jumlah neutrofil dengan penurunan tingkat limfosit dan peningkatan laju sedimentasi eritrosit (ESR) menunjukkan proses inflamasi aktif dari etiologi bakteri. Untuk mengecualikan kerusakan pada organ-organ sistem kemih menggunakan urinalisis umum dan kultur untuk sterilitas.

PCR saat ini tersedia di sebagian besar laboratorium swasta. Ini tidak hanya membutuhkan spesialis berkualifikasi tinggi, tetapi juga peralatan mahal, sejumlah besar reagen. Oleh karena itu, penggunaan metode ini terbatas meskipun akurasi dan spesifisitasnya tinggi.

Polymerase chain reaction (PCR) untuk tuberkulosis

Tuberkulosis adalah salah satu penyakit paling berbahaya yang telah diderita manusia selama ratusan tahun. Meskipun para ilmuwan dapat mengidentifikasi agen penyebab dan menemukan antibiotik untuk menghilangkannya, pengobatan tidak selalu berhasil. Alasan utamanya adalah periode panjang penyakit laten atau laten, yang dapat berlangsung beberapa tahun. Diagnosis yang terlambat secara signifikan mengurangi peluang pasien untuk pulih dan hidup penuh.

Apa itu PCR?

Untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis dalam tubuh selama lebih dari seratus tahun, tes Mantoux telah berhasil digunakan. Metode lain telah membuktikan diri dengan baik: kultur bakteriologis dalam media buatan, mikroskop smear, ELISA. Namun, sejumlah besar komplikasi dan hasil positif palsu, serta durasi beberapa metode, membutuhkan pengenalan teknologi baru ke dalam metodologi diagnostik. Sebuah terobosan besar dalam bidang mikrobiologi adalah munculnya analisis PCR untuk tuberkulosis. Selama beberapa dekade, telah menunjukkan efektivitasnya dan banyak digunakan untuk diagnosis banding dari berbagai bentuk TBC.

Analisis PCR untuk TBC atau reaksi rantai polimerase adalah metode untuk mendeteksi DNA bakteri atau fragmennya, yang didasarkan pada peningkatan molekul asam nukleat di bawah aksi enzim DNA polimerase. Untuk hasil yang positif, hanya satu molekul DNA patogen yang mencukupi, oleh karena itu, metode ini dianggap sangat sensitif. Diagnosis OCP pada tuberkulosis lebih efektif daripada menabur mikobakteri dalam lingkungan buatan, karena, tidak seperti metode kultur, memungkinkan untuk membedakan antara galur liar dan galur vaksin yang divaksinasi dengan BCG. Ini menghindari kesalahan positif dan membuat diagnosis lebih akurat.

Manfaat PCR

Diagnosis PCR untuk TBC memungkinkan untuk mendeteksi bacillus Koch dalam setiap lingkungan biologis suatu organisme dengan penentuan komposisi kuantitatif mereka bahkan pada tahap awal penyakit, ketika mikobakteri dalam hibernasi. Diagnosis penyakit pada fase laten memungkinkan untuk memulai pengobatan profilaksis tepat waktu, untuk mencegah perkembangan fokus peradangan di paru-paru dan munculnya komplikasi pada organ dan sistem lain. Selain itu, tes PCR untuk TBC memiliki beberapa keunggulan:

• spesifisitas tinggi - 90-100%;
• kecepatan tinggi - dari 4 jam hingga 2 hari;
• sensitivitas tinggi, terutama pada defisiensi imun;
• diagnosis diferensial.

Keuntungan utama dari metode ini adalah bahwa diagnosis CRC tuberkulosis pada anak-anak memungkinkan untuk membedakan bentuk penyakit yang disebarluaskan dari fokus terbatas, bahkan dengan hasil negatif dari tes lain. Pengujian diferensial memungkinkan Anda memilih rejimen pengobatan yang tepat dan meningkatkan efektivitas terapi.

Spesifisitas tinggi dari analisis ini dicapai dengan menghilangkan reaksi silang dengan molekul asam nukleat lainnya, dan sensitivitas yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi mikobakteri bahkan dalam volume kecil dari bahan yang dikumpulkan. Metode PCR sputum untuk tuberkulosis memiliki keandalan terbesar, spesifisitasnya mencapai 100% dibandingkan dengan studi bahan biologis lainnya.

Mekanisme khusus PCR memberikan banyak peluang untuk mendeteksi stik Koch pada pasien yang mengalami gangguan sistem imun. Menurut metode analisis, reaksi mendeteksi antigen, sehingga tidak masalah jika tubuh memproduksi antibodi terhadap patogen, atau tidak. Dengan demikian, dimungkinkan untuk mendiagnosis bentuk luar paru penyakit dan kasus lanjut pada pasien dengan ketidakakuratan dalam sistem kekebalan tubuh, yang tidak mungkin menggunakan metode lain.

Kekurangan dari metode ini

Meskipun banyak keuntungan dan sensitivitas tes yang tinggi, PCR untuk TBC dapat memberikan hasil negatif palsu. Karena sejumlah kecil biomaterial diambil untuk diagnosis, fakta bahwa patogen "bersembunyi" dalam sel atau fokus peradangan tidak dikecualikan dan tidak dilepaskan di luar.

Sensitivitas metode ini pada anak-anak adalah 25-80%. Sebagai contoh, dalam penelitian acak pada sekelompok pasien dengan diagnosis yang terbukti secara klinis, tes darah PCR untuk tuberkulosis memberi hasil positif hanya pada 50% pasien. Dalam hal ini, ketika menguji anak untuk mikobakteri patogen, tidak mungkin untuk mengganti satu metode diagnostik dengan yang lain. Untuk memverifikasi sepenuhnya tidak adanya infeksi, perlu dilakukan penelitian komprehensif dalam beberapa cara sekaligus.

Proses pengumpulan

Kondisi utama untuk keandalan diagnostik PCR adalah kepatuhan terhadap aturan untuk mengumpulkan cairan biologis untuk dianalisis. Materi yang terkontaminasi atau terkumpul secara tidak tepat dapat menyebabkan hasil yang salah. Yang paling umum adalah analisis dahak, darah dan urin, tetapi untuk diagnosis diferensial yang lebih dalam, Anda dapat mengambil sampel dari isi lambung, cairan sinovial, cairan serebrospinal, cairan flushing bronkus, sperma, sekresi prostat.

PCR urin untuk TBC diambil di pagi hari setelah kebersihan genital eksternal dengan buang air kecil ke dalam wadah steril. Selama prosedur, penting untuk tidak menyentuh dinding bagian dalam wadah untuk mencegah masuknya mikroorganisme pihak ketiga. Wanita yang menjalani kehidupan seks biasa harus memasang tampon di vagina untuk menghindari keluarnya cairan dari pihak ketiga.

Tes darah dilakukan pada pagi hari dengan perut kosong, dan PCR sputum untuk TBC dapat dilakukan kapan saja sepanjang hari dengan kebersihan mulut wajib sebelumnya. Ini diperlukan untuk menghilangkan sisa makanan yang mungkin masuk ke dalam wadah. Ketika mengeluarkan dahak, penting untuk mencegah masuknya air liur dan lendir dari nasofaring ke dalam wadah, ini dapat merusak data analisis.

Studi tentang isi perut dilakukan di rumah sakit di pagi hari, sementara dahak yang tertelan semalaman ada di perut. Untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis, metode ini membuat pembenihan tiga kali lipat, yang kemungkinan besar memungkinkan untuk mengisolasi basil Koch.

Hasil decoding

Analisis kualitatif PCR memberikan 2 jenis hasil "terdeteksi" atau "tidak terdeteksi." Mereka menandakan vonis positif dan negatif, masing-masing. Jawaban "terdeteksi" berarti bahwa DNA dari agen infeksi hadir dalam sampel uji, dan dengan kemungkinan 97% tubuh terinfeksi TBC. Hasil negatif menunjukkan tidak adanya Koch menempel DNA dalam sampel bahan biologis, dan memberikan kemungkinan 97% bahwa tubuh tidak memiliki jumlah besar mikobakteri, dan 60% bahwa orang tersebut tidak terinfeksi.

Spesifisitas terbesar untuk diagnosis TB adalah tes darah dan dahak. Dengan hasil positif, mereka menunjukkan infeksi pada tubuh, yang membutuhkan langkah-langkah terapi yang mendesak. Studi tentang biomaterial lain mungkin mengindikasikan bukan perjalanan penyakit, tetapi hanya keberadaan bakteri asing. Ini terjadi ketika seseorang adalah pembawa penyakit, tetapi tidak menyebarkan infeksi ke lingkungan dan tidak menginfeksi orang sehat.

Analisis PCR kuantitatif dilakukan lebih jarang, dan dokter yang hadir berurusan dengan decoding hasilnya. Indikator penelitian digunakan untuk menentukan aktivitas penyakit dan tingkat kerusakan pada tubuh. Berdasarkan data yang diperoleh, seorang spesialis dapat menentukan efektivitas pengobatan, dan jika perlu, menyesuaikan skema terapeutik.

TBC selalu dan tetap menjadi salah satu masalah paling serius bagi kesehatan seluruh umat manusia. Metode diagnostik modern dapat mendeteksi penyakit pada tahap awal untuk memulai perawatan tepat waktu. Tes tuberkulin, mikroskop apusan, kultur bakteri pada media nutrisi buatan telah membuktikan diri dalam bidang diagnosis laboratorium tuberkulosis. Namun, penantian panjang untuk hasil dan peningkatan frekuensi pembacaan positif palsu membuat mereka usang dan membawa ke depan teknologi yang lebih maju. Analisis PCR adalah metode yang sangat spesifik dan sangat efektif untuk mendiagnosis TB. Hasilnya adalah yang paling dapat diandalkan di antara semua metode laboratorium yang diusulkan untuk mendeteksi tongkat Koch. Hal ini memungkinkan tidak hanya untuk membuat putusan akhir, tetapi juga untuk melakukan diagnosis banding yang diperlukan.

Reaksi berantai polimerase untuk TBC

Analisis PCR untuk TBC memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi penyakit pada setiap tahap perkembangan dengan jumlah minimum mikobakteri atau bahkan jika ada fragmen dalam tubuh manusia oleh DNA patogen.

Apa itu PCR?

PCR muncul relatif baru-baru ini. Pada tahun 1983, metode ini dibuat oleh ahli mikrobiologi Amerika, Carey Mullis, yang menerima Hadiah Nobel. Basis PCR adalah penggandaan berulang dari wilayah DNA tertentu dengan bantuan enzim in vitro. Sebagai hasilnya, DNA patogen modis untuk divisualisasikan bahkan dalam kehadirannya dalam jumlah minimal (jejak kehadiran). Ini adalah standar khusus emas.

Tuberkulosis PCR (proses rantai polimer) adalah prosedur diagnostik untuk mendeteksi infeksi menggunakan rekayasa genetika. Metode penelitian ini digunakan di laboratorium medis mikrobiologis, virologi, dan imunologi yang meragukan dan praktis tidak menjanjikan dalam hal kasus diagnosis.

Apa yang dibutuhkan untuk analisis?

Analisis ini membutuhkan 3 komponen:

• Sampel DNA.
• Senyawa nukleotida.
• Enzim polimerase

Analisis diserahkan ke laboratorium sebagaimana ditentukan oleh dokter yang merawat.

Apa dasar dari metode ini?

Pada awal survei, segmen DNA mikroba diekstraksi dari biofluid.

PCR menentukan tipe patogen, 2-3 jam setelah tes. Namun, tidak perlu diisolasi dari bahan biologis atau tumbuh untuk waktu yang lama di laboratorium. Yang utama adalah bahwa sampel tersebut mengandung sepotong DNA yang terinfeksi. Selama analisis TBC dibuat sintesis buatan infeksi asam ribonukleat secara in vitro. Karena reaksi cepat setelah beberapa jam, Anda bisa mendapatkan hasil yang andal.

Tahapan diagnosis

Tuberkulosis PCR adalah metode diagnostik sederhana yang memungkinkan Anda mendapatkan jawaban dalam waktu singkat. Untuk menentukan tbc, bahan biologis dari orang yang terinfeksi (darah, dahak, cairan biologis) diambil.

Diagnosis terjadi dalam tiga tahap utama:

• Setelah pengambilan sampel di laboratorium, bentuk utama DNA dihancurkan. Pada suhu 980 derajat, 1,5 rantai dipisahkan dalam 1,5 menit.
• Pada tahap selanjutnya, anil dilakukan, suhu udara dikurangi oleh beberapa divisi, DNA terhubung ke primer.
• Tahap terakhir dari penelitian ini disebut perpanjangan. Ini adalah biosintesis molekul.

Untuk mengidentifikasi DNA yang diinginkan dengan partikel infeksi, diagnostik dapat dilakukan 20-25 kali.

Apakah perlu melakukan PCR untuk TBC?

Analisis PCR untuk TBC selalu dilakukan ketika ada kebutuhan untuk itu, itu termasuk dalam standar kualitas memeriksa pasien untuk TBC. Untuk melakukan itu, Anda hanya perlu rujukan dari dokter Anda. Paling sering, di poliklinik, metode diagnostik lain digunakan untuk menentukan TBC.

Ini termasuk:

• Mempertanyakan dan mengumpulkan anamnesis.
• Pemeriksaan kesehatan.
• Tes tuberkulin Mantoux.
• Sinar-X atau fluorografi.
• Ultrasonografi.
• Diagnosis mikroskopis spesimen dahak.

Meskipun banyak alat diagnostik, jumlah yang terinfeksi setiap tahun terus bertambah. Selain itu, patologi telah memperoleh beberapa fitur: tingkat keparahan proses, peningkatan hasil yang mematikan, dan kekebalan patogen terhadap obat-obatan.

Dokter tidak merekomendasikan meninggalkan inspeksi dan vaksinasi tahunan, karena hal ini meningkatkan risiko terinfeksi. Analisis PCR memiliki banyak keuntungan, sehingga dianggap paling akurat dan informatif dari semua metode instrumental untuk mendeteksi tbc dan banyak digunakan di klinik modern.

Apa nilai metode ini?

Proses rantai polimer sering digunakan bersama dengan metode tambahan untuk mendeteksi infeksi TBC. Nilai dari metode ini adalah sebagai berikut:

• Waktu memegang yang singkat. Sudah setelah 2-3 jam setelah donor darah, adalah mungkin untuk mendeteksi keberadaan infeksi dalam bahan biologis. Ini sangat diperlukan dalam kasus di mana ada pertanyaan tentang hidup dan mati, dan Anda perlu mengidentifikasi diagnosis yang tepat untuk intervensi bedah.
• Beberapa metode diagnostik memiliki kontraindikasi sendiri dan tidak selalu menampilkan gambaran lengkap diagnosis. Dengan bantuan PCR, patogen terdeteksi dengan segera, dan dimungkinkan untuk melakukan prosedur untuk orang-orang dari segala usia.
• Sebagai sampel, Anda dapat mengambil bahan biologis yang terinfeksi. Untuk menentukan bentuk penyakit paru-paru, diambil urin atau saliva. Sampel darah membantu mengidentifikasi semua bentuk patologi. Cairan tulang belakang diperlukan untuk menentukan meningitis tuberkulosis.
• Metode keamanan. Untuk penelitian hanya membutuhkan bahan biologis pasien. Karena itu, prosedur ini sepenuhnya aman dan tidak berbahaya bagi anak-anak dan orang dewasa, tidak seperti fluorografi, yang dilakukan sejak usia 18 tahun, dan Mantoux, yang menyebabkan reaksi negatif dalam tubuh.
• Tes sangat sensitif. Itu memungkinkan untuk mengidentifikasi patologi bahkan pada tahap awal perkembangan, ketika virus belum menyerang semua sel-sel tubuh.
• Metode yang efektif untuk diagnosis kekambuhan patologi.
• Cara inovatif untuk mengidentifikasi tongkat Koch dari hari-hari pertama pengembangannya. Ini memungkinkan Anda untuk segera memulai perawatan yang benar dan menyelamatkan seseorang dari kematian. Pada tahap awal perkembangan, patologi dapat disembuhkan sepenuhnya tanpa komplikasi.

Metode diagnosis ini memiliki banyak keuntungan dan secara aktif digunakan di berbagai lembaga medis. Namun, meskipun memiliki kelebihan, PCR juga memiliki fitur negatif.

Apa kerugiannya?

Kerugian dari proses rantai polimer meliputi:

• Tingginya biaya prosedur.
• Metode ini tidak cocok untuk mereka yang telah menjalani pengobatan tbc, karena sel-sel infeksi yang mati dapat memberikan hasil positif palsu.
• Ketika mutasi sel-sel DNA bisa menjadi hasil yang salah.
• Spesialis harus benar mengambil bahan biologis yang diperlukan untuk menentukan jenis infeksi dan tempat pelokalannya.
• Tidak selalu diizinkan untuk pasien dengan penyakit paru-paru.

Siapa yang menunjukkan analisisnya?

Paling sering, analisis semacam itu ditugaskan:

• • Jika hasil Mantoux memberikan data yang meragukan, darah diambil dari vena untuk TBC.
  • Pasien memiliki kontak dengan orang yang terinfeksi, tetapi pemeriksaan medis tidak membantu menentukan diagnosis yang benar.

• Selama operasi darurat, di mana Anda perlu tahu dalam waktu singkat apakah pasien terinfeksi.
• Selama kehamilan, ketika metode diagnostik lainnya tidak dapat memberikan hasil yang akurat tanpa membahayakan janin.

Setelah memeriksa semua kelebihan dan kekurangan dari mendiagnosis tbc, kita dapat menyimpulkan bahwa yang terbaik adalah menggunakan beberapa metode diagnostik sekaligus untuk membuat diagnosis yang akurat. Ini akan membantu memastikan bahwa ada infeksi di dalam tubuh dan pada tahap perkembangan apa itu. Setelah menetapkan diagnosis dengan benar, dimungkinkan untuk memulai pengobatan konservatif cepat dan menyelamatkan seseorang dari kematian.

Diagnosis PCR tuberkulosis

TBC adalah infeksi spesifik, fokusnya mungkin pada jaringan manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronis yang rejimen pengobatan optimalnya sulit dipilih. Salah satu alasan untuk ini adalah keterlambatan diagnosis, ketika mikobakteri, sementara di tubuh manusia, telah beradaptasi dengan banyak obat.

Apa metode diagnosis modern yang ada? Diagnosis PCR - apa itu? Bagaimana penelitian ini dilakukan? Dalam kasus apa TBC didiagnosis dengan metode ini dan apa esensinya?

Apa itu diagnosa PCR

Ini adalah salah satu metode paling modern untuk mendiagnosis tidak hanya penyakit, tetapi juga deteksi bahan biologis. Diagnosis PCR ditemukan relatif baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang ahli biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mengusulkan skema pemulihan yang kompleks untuk bahan biologis mikroorganisme dalam satu segmen pendek. Berkat penemuannya, ilmuwan dianugerahi penghargaan tertinggi - Hadiah Nobel.

Apa itu - PCR diagnosis infeksi? Polymerase chain reaction (PCR) adalah diagnosis deteksi penyakit virus, berdasarkan metode rekayasa genetika. Ini banyak digunakan dalam mikrobiologi medis, imunologi dan virologi. Metode ini bersifat universal dan membantu membuat diagnosis dengan sejumlah kecil bahan. Infeksi dapat dideteksi secara harfiah pada jam-jam pertama infeksi itu, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Metode ini terdiri dari memperoleh dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi fragmen genom (partikel DNA), biosintesisnya dengan penentuan selanjutnya ke kelas mikroorganisme mana materi genetik yang diperoleh dimiliki dengan menggunakan metode genetik molekuler.

Terlepas dari kenyataan bahwa ini adalah proses yang kompleks, butuh waktu jauh lebih sedikit daripada banyak metode biologis untuk mendeteksi agen infeksi. Hanya dalam beberapa jam, mikroorganisme dapat dideteksi oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengisolasinya dari lingkungan (darah, cairan serebrospinal, sputum) dan menumbuhkannya dalam waktu lama pada media nutrisi buatan. Sudah cukup bahwa fragmen kecil untai DNA dari agen infeksi hadir dalam bahan yang diteliti.

Dasar dari reaksi adalah kemungkinan di bawah kondisi buatan (in vitro) untuk membuat sintesis molekul asam nukleat dari agen infeksi.

Apa yang dibutuhkan untuk PCR?

1. Primer adalah segmen DNA dari mana biosintesis atau penciptaan dimulai.
2. Nukleotida atau senyawa kompleks yang menjadi dasar molekul DNA atau RNA.
3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin terjadi tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahapan diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekuler dilakukan oleh PCR? Prosedurnya sederhana dan membutuhkan waktu singkat, dengan mempertimbangkan pengumpulan materi.

1. Sebelum memulai penelitian, mereka mengambil bahan biologis yang diperlukan - ini adalah air cuci bronkial, darah, isi lambung, dahak. Jenis bahan biologis tergantung pada patogen yang dicurigai.
2. Denaturasi atau penghancuran struktur primer DNA, yang terdiri dari dua rantai. Inti dari tahap ini adalah untuk memisahkan dua sirkuit di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang berlangsung tidak lebih dari dua menit).
3. Pada tahap PCR berikutnya, yang disebut anil, suhu berkurang beberapa derajat sehingga primer akan mengikat untai DNA.
4. Perpanjangan, di mana sintesis molekul yang diinginkan berlangsung secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 siklus yang menerima jumlah salinan DNA mikroorganisme yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Apakah PCR memerlukan diagnosis TB?

Tidak mungkin bagi semua orang yang dicurigai tuberkulosis untuk melakukan PCR, karena metode ini membutuhkan peralatan yang mahal. Tidak semua klinik umum mampu membelinya. Selain itu, kebetulan bahwa metode biasa dalam mendiagnosis infeksi pada kebanyakan kasus juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

• survei pasien, anamnesis;
• pemeriksaan lengkap dari orang tersebut;
• sebuah studi menggunakan tes tuberkulin Mantoux;
• radiografi atau fluorografi;
• diagnostik komputer jika perlu;
• metode penelitian mikrobiologis: pemeriksaan mikroskopik dan pemeriksaan bakteriologis dahak.

PCR untuk TBC dilakukan dalam kasus-kasus khusus ketika sulit untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk melakukan metode instrumental lainnya.

Meskipun ada banyak metode diagnostik, kejadian TB terus bertambah. Saat ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga fitur lainnya:

• penyakit ini sering terjadi dalam bentuk yang parah;
• jumlah kasus fatal meningkat;
• semakin resisten terhadap kemoterapi modern didiagnosis bentuk penyakit.

Keengganan orang itu sendiri untuk menjalani pemeriksaan medis rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi mengarah pada penyebaran tuberkulosis. Dalam kondisi seperti itu, kita memerlukan metode penelitian yang cepat, informatif dan efektif yang harus dapat diakses oleh anak-anak dan orang dewasa. Semua metode diagnostik di atas jauh lebih rendah daripada PCR.

Manfaat mendiagnosis TB dengan PCR

Penelitian ini, meskipun baru, telah membuktikan dirinya dengan baik, terutama dalam kasus kontroversial di mana tidak mungkin untuk membuat diagnosis karena sejumlah alasan.

Berkat PCR, jauh lebih mudah untuk mendeteksi agen penyebab TBC dalam bahan uji.

Keuntungan dari diagnosa PCR adalah sebagai berikut.

1. Ini adalah analisis cepat. Sebuah fragmen kecil dari molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi darurat ketika, misalnya, sebelum operasi perlu untuk menentukan apakah seseorang sakit dengan TBC.
2. Analisis PCR diperbolehkan jika metode lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mendeteksi TB paru, kadang-kadang Anda harus mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan menjadi radiasi dosis besar).
3. Dengan bantuan PCR, setiap lingkungan biologis diperiksa untuk mengetahui adanya patogen di dalamnya. Misalnya, Anda dapat melakukan penelitian cairan serebrospinal, jika ada kecurigaan meningitis tuberkulosis.
4. Diizinkan diagnosis PCR penyakit menular pada anak-anak, karena metode ini aman.
5. Memungkinkan Anda mengidentifikasi patogen pada setiap tahap penyakit.
6. Sensitivitas PCR yang tinggi memungkinkan untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis, bahkan jika hanya ada beberapa mikroorganisme dalam bahan biologis.
7. Adalah baik untuk melakukan diagnosis kekambuhan penyakit.

Setelah semua membaca PCR tampaknya metode diagnostik yang hampir sempurna, yang harus membuat semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kelemahan di sini, mereka harus diperhitungkan.

Kekurangan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Saat ini, diagnostik semacam itu lebih jarang terjadi daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasannya.

1. Ini adalah metode penelitian yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak ada karena biayanya yang tinggi, tetapi analisis masih dapat dilakukan di laboratorium berbayar.
2. Segera setelah perawatan, mikobakteri mati atau hidup dalam jumlah kecil mungkin masih ada dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif selama diagnosa PCR), sehingga metode ini tidak dapat diandalkan saat ini, tidak masuk akal untuk melakukannya.
3. Mutasi mikobakteri menyebabkan PCR tidak efektif - urutan untai DNA normal tidak dapat disintesis.
4. Penting untuk memilih lingkungan yang tepat untuk penelitian, darah diambil hanya jika diduga terinfeksi (sepsis), tidak perlu mengambil dahak jika ada masalah tuberkulosis organ sistem saraf. Dalam hal ini, PCR tidak akan dapat mendeteksi patogen dan diagnosis tidak akan informatif.

Indikasi untuk mendeteksi TB menggunakan analisis PCR

Diagnosis PCR tuberkulosis dilakukan paling sering pada kasus kontroversial. Kapan dokter merujuk penelitian ini?

1. Jika sulit untuk membuat diagnosis menggunakan metode yang tersedia biasa, tetapi ada kontak dengan pasien dengan TBC.
2. Dalam kasus ketika seseorang tidak dapat dikirim ke klinik untuk menjalani tes rutin rutin untuk TB, lebih mudah untuk memeriksanya menggunakan PCR, karena dahak untuk tes dapat dikirim dalam toples dan diagnosa dikonfirmasi dalam beberapa jam.
3. Jika seseorang akan menjalani operasi darurat dan sangat mendesak untuk mengetahui apakah dia sakit TBC.
4. Jika perlu, seorang wanita hamil juga lebih baik untuk memeriksa TBC menggunakan PCR, karena metode ini aman.
5. Pada basis berbayar, siapa pun yang belum didiagnosis dengan TB telah dikonfirmasi menggunakan metode bakteriologis dan fluoroskopi. Hal ini terjadi ketika lesi di paru-paru tidak terlihat dalam gambar langsung, dan orang selama pengiriman dahak untuk penelitian tidak dapat mengikuti rekomendasi untuk pengumpulan bahan yang benar. Dalam hal ini, orang tersebut khawatir tentang semua gejala karakteristik TB paru.
6. Ketika ada keraguan tentang hasil tes Mantoux.
7. Lebih disukai untuk melakukan diagnosis PCR tuberkulosis pada anak-anak. Prosedur ini aman, tidak menciptakan paparan radiasi tambahan, dan efektif dalam mendeteksi bentuk penyakit yang sulit didiagnosis.

Diagnosis tuberkulosis yang tepat waktu adalah kunci untuk perawatan yang diresepkan dengan benar dan mengurangi penyebaran penyakit. Seringkali, metode deteksi penyakit yang sudah dikenal tidak selalu efektif. Oleh karena itu, PCR saat ini adalah salah satu cara yang paling dapat diandalkan dan aman untuk mendeteksi infeksi pada tahap awal perkembangannya.